不同浓度脂多糖对哮喘大鼠气道平滑肌细胞合成分泌功能的影响及其机制的研究-呼吸内科学专业论文.docxVIP

独 创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取 得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文 中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如 没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用 过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定， 有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被 查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入 有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编 学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社、中国科学技术 信息研究所将本学位论文收录到《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》、 《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保 密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签字： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 I I 目 录 不同浓度脂多糖对哮喘大鼠气道平滑肌细胞合成分泌功能的影响及其机制 的研究…………………………………………………………………………1 中文摘要………………………………………………………………………1 ABSTRACT……………………………………………………………………5 英汉缩略词对照表……………………………………………………………10 前言……………………………………………………………………………11 第一部分 不同浓度脂多糖对哮喘大鼠气道平滑肌细胞合成分泌功能的影 响及其机制的研究……………………………………………………………15 1.1 材料………………………………………………………………………15 1.1.1 实验动物 ………………………………………………………………15 1.1.2 主要实验试剂 …………………………………………………………15 1.1.3 主要实验仪器 …………………………………………………………16 1.2 方法………………………………………………………………………16 1.2.1 大鼠哮喘模型的建立 …………………………………………………16 1.2.2 哮喘大鼠原代气道平滑肌细胞的分离、培养…………………………17 1.2.3 ASMCs 的鉴定 …………………………………………………………18 细胞形态 ……………………………………………………………18 免疫细胞化学 SP 法检测 ……………………………………………18 1.2.4 实验分组 ………………………………………………………………18 1.2.5 ELISA 检测细胞上清液中 IL-4、IFN-γ的蛋白含量…………………19 1.2.6 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测 TLR4mRNA 在 ASMCs 中的 表达水平………………………………………………………………………20 1.2.7 统计学分析 ……………………………………………………………23 1.3 结果………………………………………………………………………23 II II 1.3.1 ASMCs 培养情况 ………………………………………………………24 1.3.2 ASMCs 鉴定 ……………………………………………………………24 细胞形态………………………………………………………………24 免疫细胞化学 SP 法 …………………………………………………24 1.3.3 ELISA 检测细胞上清液中 IL-4、IFN-γ的蛋白含量…………………24 RT-PCR 检测 TLR4 mRNA 在 ASMCs 中的表达水平…………………25 1.4 讨论………………………………………………………………………26 第二部分 不同浓度脂多糖对哮喘大鼠气道炎症、气道重塑及 TLR4 表达 的影响…………………………………………………………………………31 2.1 材料 ………………………………………………………………………31 2.2 方法………………………………………………………………………32 2.2.1 大鼠哮喘模型的建立……………………………………………………32 2.2.2. 实验分组………………………………………………………………32 2.2.3 组织标本制备 …………………………………………………………32 HE 染色