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小鼠口服五氯柳胺混悬剂急性毒性研究 　　摘要：通过进行小鼠急性毒性试验，对五氯柳胺混悬剂的安全性进行初步评价。预试验采用递增法确定给药的剂量范围、正式试验分组以及组距等。正式试验按照简化寇氏法进行，观察给药后小鼠的体征变化，统计死亡率，记录死亡时间，计算五氯柳胺混悬剂的半致死剂量（LD50）以及95%的可信限。结果表明，小鼠口服五氯柳胺混悬剂的LD50值为1.679 g/kg，95%的置信区间为1.439～1.947 g/kg，按照化学物毒性分级可得：五氯柳胺混悬剂为低毒物质。 　　关键词：五氯柳胺混悬剂；小鼠；急性毒性试验；半致死剂量（LD50） 　　中图分类号： S855.9文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）06-0340-02 　　收稿日期：2016-01-14 　　基金项目：国家科技支撑计划（编号：2015BAD1101）；国家现代农业产业技术体系专项（编号：CAR-38）。 　　作者简介：张吉丽（1992―），女，黑龙江大庆人，硕士，研究方向为动物抗寄生虫药。E-mail：zhangjlzjl@。 　　通信作者：张继瑜，研究员，博士生导师，研究方向为兽医药理学与毒理学。E-mail：infzjy@。五氯柳胺是广谱高效的水杨酰苯胺类化学合成抗寄生虫药物，主要用于治疗牛、羊的肝片吸虫感染，在抗绦虫、线虫等方面也具有较好的治疗效果[1]。自20世纪中后期报道其抗虫活性后，国外对其进行了大量研究，并相继报道了五氯柳胺在临床试验中显著的治疗效果[2-3]。国内并未对其进行系统性研究，相关报道较少。因其水溶性差，有一定的毒性，限制了其临床应用。五氯柳胺混悬剂，克服了五氯柳胺的难溶性，且性质稳定、质量可控、治疗效果确切，本研究采用改良寇氏法进行小鼠的急性毒性试验，从而评价五氯柳胺混悬剂的安全性。 　　1材料与方法 　　1.1试验动物 　　SPF级昆明系小鼠110只，购自中国农业科学院兰州兽医研究所。体质量在18～22 g之间，雌雄各半，雌性未产未孕。试验前饲养3～5 d，自由饮水觅食，以适应试验环境。 　　1.2供试药品 　　五氯柳胺口服混悬剂，由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部新兽药工程重点实验室制备。试验前，精确称定处方中主药及辅料，配制成0.209 g/mL的混悬剂，待用。按照处方中各辅料的用料配比，配制辅料对照组的浓度为 0.100 g/mL。 　　1.3预试验 　　本试验采用递加法分别对五氯柳胺混悬剂组以及辅料对照组进行预试验。 　　五氯柳胺混悬剂预试验组：将20只SPF级昆明系小鼠，随机分为5组，每组4只，雌雄各半，分别给小鼠称体质量，计算给药剂量。最高剂量组给药量为3.375 g/kg体质量，最低剂量组给药量为1.000 g/kg体质量。灌胃给药，观察7 d，记录小鼠的死亡数，确定最小致死剂量（LD100）和最大耐受剂量（LD0）。从而确定正式试验组数（N）以及各组间剂量比（r）。 　　辅料对照组预试验同样采用20只SPF级昆明系小鼠，雌雄各半，随机分为5组，每组4只，分别给小鼠称体质量，计算给药剂量。最高给药剂量为5.000 g/kg体质量，最低给药剂量为1.000 g/kg体质量。记录死亡数，确定最小致死剂量（LD100）和最大耐受剂量（LD0）。 　　1.4正式试验 　　根据预试验得到的最小致死剂量（LD100）和最大耐受剂量（LD0），采用简化寇氏法计算正式试验组数（N）以及各组间剂量比（r）。由于辅料试验的LD100值大于5.000 g/kg体质量，将小鼠样本量增至10只，雌雄各半，仍未出现死亡现象，按照化学药物毒性分级，可以得到结论：混悬剂辅料实际无毒。 　　根据五氯柳胺混悬剂预试验结果将正式试验分为6组，包括空白对照组和5个不同剂量试验组。将60只小鼠，雌雄各半，体质量为18～22 g，随机分为6组，试验组的给药剂量为：3.375、2.488、1.836、1.355、1.000 g/kg体质量。空白对照组给予等量的饮用水。灌胃给药，观察7 d，观察给药后小鼠的外观体征、采食状况、行为活动等相关症状，记录每组小鼠死亡数、死亡时间，并对死亡小鼠进行剖检，观察病理变化。用改良寇氏法计算LD50以及95%的置信区间。 　　2结果与分析 　　2.1预试验结果 　　由预试验可得：辅料预试验组的LD0大于5.000 g/kg，增加试验动物数量至10只，仍未出现死亡现象，按照化学药物的毒性分级可以视为混悬剂辅料实际无毒。 　　五氯柳胺混悬剂预试验组的LD100为3.375 g/kg，LD0为1.000 g/kg。从而确定正式试验的组数（N）为5。各组之间的剂量比值为r=1.355。由此将预试验分为6组，其中包括不同剂量试验组5组以及空白对照组