手工微柱凝胶免疫检验法在ABORhD血型抗原鉴定中价值初探.docVIP

手工微柱凝胶免疫检验法在ABORhD血型抗原鉴定中价值初探 　　摘要：目的：探索手工微柱凝胶免疫检验法在ABO、RhD血型抗原鉴定中的价值。方法：收集本院2013年3月～2014年3月不同科室、病种、性别的患者的血液样本700例，均一分为二，成为1400例血液样本，分别用手工微柱凝胶法和试管法进行ABO、RhD血型抗原鉴定，比较反应结果及反应强度。结果：手工微柱凝胶法和试管法相比，检测结果准确性上无统计学差异（P0.05），反应强度上手工微柱凝胶法明显优于试管法。结论：手工微柱凝胶法用于检测ABO、RhD血型抗原鉴定，较传统的试管法有一定优势，值得临床推广。 　　关键词：微柱凝胶法；试管法；血型鉴定 　　【中图分类号】R457.1+1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602（2015）01-0070-01 　　为保证临床输血的安全性，需要进行ABO和RhD血型鉴定试验。检测结果准确与否，直接关系到受血者的生命安全。目前临床上较传统的检测方法是试管法，此法结果准确，但也存在操作难以规范、结果不易长期保存等缺点[1]。1994年，美国食药监局（FDA）批准微柱凝胶试验（MGT）作为红细胞抗体检测及ABO和RhD血型鉴定的选用方法[2]，目前已在国外大量应用。而在国内，微柱凝胶法也逐渐被各大医院和血站使用，其优点是易于自动化、标准化，反应结果保存时间长。现将我院收集到的血液样本分别进行微柱凝胶法和试管法检测，比较其优劣。 　　1 资料和方法 　　1.1 样本 　　收集2013年3月～2014年3月间各临床科室送到检验科的血液样本700例，均一分为二，成为1400例血液样本，分为A、B两组，做好标记，样本间无病种、性别差异。 　　1.2 试剂和仪器 　　A、B单克隆标准血清：购于南京华欣药业生物工程有限公司；抗D单克隆抗血清：来源于加拿大进口分包装；微柱凝胶免疫检测卡：购于长春博讯生物技术有限责任公司；BYL03―Ⅰ型血型血清多用离心机：购于长春博彦科学仪器有限责任公司。检测试剂均在有效期内并严格按照试剂及仪器说明书操作。 　　1.3 方法 　　A组：首先观察微柱凝胶卡外观，若有干胶、杂质、气泡则不可使用，检查无误后，将卡平衡至室温（18-25℃），再用卡式离心机1000r/min离心3min；然后制备红细胞悬液，取样本血液2ml，用EDTA抗凝，在室温下2000rpm离心2min，分离血浆，取10μl红细胞，用生理盐水配成0.8%的红细胞悬液；接着斯开微柱凝胶卡上端的锡箔纸，在A、B、RhD孔中分别加入红细胞悬液50μl，卡放到卡式离心机中离心5min，之后观察记录结果。 　　B组：按照《全国临床检验操作规程》[3]操作。 　　1.4 结果判定 　　A组：阳性结果：红细胞抗原与相应抗体发生凝集，产生的复合物浮在凝胶表面或胶中；阴性结果：红细胞没有与相应抗体发生反应，沉在微柱凝胶的尖底部；反应强度：红细胞与相应抗体产生的复合物位于凝胶表面为强阳性，位于胶中为弱阳性。 　　B组：阳性结果：红细胞抗原与抗体凝集；阴性结果：红细胞抗原与抗体未发生反应。反应强度：红细胞抗原与抗体凝集出一个大块或多个较大块复合物为强阳性，出现无数小块或细小颗粒凝集为弱阳性，不出现凝集为阴性。 　　强阳率=强阳性数/（强阳性数+弱阳性数）×100% 　　1.5 统计学处理 　　采用SPSS17.0软件处理实验数据，计量资料使用x±s表示，采用t检验；计数资料使用χ2检验。P0.05为差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 两组血液样本ABO血型鉴定结果比较 　　1400例血液样本中，共有5例出现误判，其中微柱凝胶法组出现1例，原因是样本红细胞破碎，出现假阳性，将B型错误鉴定为AB型，之后经过重新采血鉴定结果和试管法相符合；试管法组出现4例错误，原因是患者A抗原低，出现假阴性，其中2例将A型误判为O型，另外2例将AB型误判为B型。两组间鉴定结果的符合率为100%，无显著性差异（P0.05），详见表1。 　　2.2 两组血液样本ABO血型鉴定反应强度结果比较 　　试验结果显示，微柱凝胶组700例血液样本中出现1例假阳性，其余699例中强阳性430例，阴性269例，强阳率为100%；试管法组700例血液样本中，除去假阴性4例，则出现强阳性335例，弱阳性90例，阴性271例，强阳率为78.8%。两组相比，微柱凝胶法的反应强度明显优于试管法，组间有显著性差异（P0.05）。详见表2。 　　2.3 两组血液样本抗D结果比较 　　试验结果显示，微柱凝胶法组检测出抗D强阳性699例，阴性1例，强阳率100%，而试管法组强阳性612例，弱阳性87例，阴性1例，强阳率87.5%，两者相比符合率没有显著差异，但微