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恩诺沙星在乌鳢体内代谢及其代谢产物消除研究 　　摘 要：采用肌注的方式，给药浓度10mg/kg，并采用液相色谱荧光法检测，初步研究了恩诺沙星在乌鳢体内的代谢规律及代谢产物环丙沙星的消除规律。实验结果表明：恩诺沙星及环丙沙星在血浆样品中的回收率为88.5%～91.3%，在肾、脾、肝、肌肉组织样品中的回收率为82.1%～87.6%。恩诺沙星、环丙沙星的最低检测限均可达到0.01mg/kg。恩诺沙星在乌鳢体内肌注给药后，血样中浓度快速升高，2h左右基本达到顶峰，然后再缓慢降低；在肾、脾、肝组织中，9～12 h浓度达到顶峰，其中依次为肾脾肝，5d后还有2～4mg/kg的残留；肌肉组织中较其他组织浓度升高稍缓，在18～24h达到顶峰，但是在29d还有浓度0.05mg/kg左右残留。肌注给药后0.5h在样品血浆中、2h在肌肉组织中就能检出其代谢产物环丙沙星，且环丙沙星的浓度在血浆中24h内在0.1～0.4mg/kg范围内波动；而在代谢组织肾、脾、肝中环丙沙星浓度慢慢增加，在12h达到峰值，5d内浓度明显，29d检测不出；肌肉组织则浓度慢慢增加，5d达到实验最高浓度0.36mg/kg，29d时检测不出。 　　关键词：乌鳢；恩诺沙星；环丙沙星；代谢 　　中图分类号 S9 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2013）23-15-02 　　恩诺沙星（enrofloxacin，ENR）为第三代喹诺酮类药物，是动物专用抗菌药，广泛应用于各种动物感染性疾病的预防和治疗。恩诺沙星在许多动物体内发生脱乙基反应代谢生成具有活性作用的环丙沙星（ciprofloxacin，CIP）。恩诺沙星的原药及其代谢产物环丙沙星在动物体内共同作用，这也是此药效果优于其他同类药物的最主要的原因之一。但是在《无公害食品渔用药物使用准则》中已将环丙沙星明确规定为禁用渔药[1]。因此，了解恩诺沙星的代谢规律及其代谢产物环丙沙星的消除规律同样重要。目前关于恩诺沙星作用于水产养殖动物药代动力学方面的研究较多，如拟穴青蟹[2]、罗氏沼虾[3]、欧洲鳗鲡[4]、鲤鱼[5]、杂交鲟[6]等，但尚未见关于乌鳢体内恩诺沙星代谢规律及其代谢产物环丙沙星的消除规律的报道。本实验中建立了恩诺沙星及环丙沙星在乌鳢体内的检测方法，同时研究了恩诺沙星在乌鳢体内的代谢规律及其代谢产物环丙沙星的消除规律，以期为检测恩诺沙星及环丙沙星在水产动物体内的残留及在养殖中的合理使用提供参考资料。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验鱼 实验用乌鳢来自本单位水产研究所自繁自养的杂交鳢，体重250～300g，实验前一星期暂养在实验室玻璃缸中。 　　1.1.2 仪器设备 Waters e2695高效液相色谱仪（2475荧光检测器，美国Waters公司）；分散机（IKA T18）；氮吹仪（Organomation N-EVAP- 24）；旋涡混合器（VORTEX Wizard）；Milli-Q纯水系统（美国Millipor公司）。 　　1.1.3 药品与试剂 甲醇、乙腈为HPLC级。磷酸二氢钠、氢氧化钠、磷酸、三乙胺均为分析纯。恩诺沙星、盐酸环丙沙星标准品（德国Dr?Ehrenstorfer公司，纯度98%）。 　　酸化乙腈：乙腈：（盐酸+水=1+1）=500∶4；磷酸盐缓冲液：0.1mol/L NaH2PO4，用5mol/L氢氧化钠溶液调pH至7.0；0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液：取磷酸3.4mL，加水至1 000mL。用三乙胺调pH至2.4；固相萃取小柱：Waters Oasis HLB 3mL/60mg。 　　1.2 方法 　　1.2.1 给药方式及取样 实验条件下暂养的健康杂交鳢，随机分组，每组5尾，留取未给药的作为空白对照。实验组每尾一次性肌注恩诺沙星10mg/kg体重，分别于给药后0.5h、1h、2h、4h、6h、9h、12h、18h、24h、5d、29d由心脏取血，肝素抗凝，3 000r×15min离心分离血浆，同时取肌肉、肾、肝脏组织，所有样品保存于-18℃待测。 　　1.2.2 样品处理 　　1.2.2.1 血浆样品 从冰箱中取出血浆样品，恢复至液态，准确称取2g样品，加6mL磷酸缓冲液，漩涡混匀，过HLB固相萃取小柱（预先用3mL甲醇活化、5mL水洗）、5mL水洗柱，2mL流动相洗脱（药物浓度高的血清样用5mL流动相洗脱），过0.45μm滤膜，上机测定。 　　1.2.2.2 肝、肾、肌肉样品 称取1～5g肝、肾、肌肉样品，加入15mL酸化乙腈，分散机匀浆1min，加2倍样品质量的无水硫酸钠，漩涡提取，离心，取上清液。残渣再用10mL酸化乙腈提取1次。合并上清液，35℃氮气吹干。准确加入 2.0mL流动相溶解，再分别用5mL正己烷净化2～3