猪ifnα融合ppv vp2pcv2 orf2基因真核表达载体构建及免疫原性研究-construction and immunogenicity of porcine ifn α fusion ppv p2p cv 2 or f2 gene eukaryotic expression vector.docxVIP

下载本文档

1
0
约6.73万字
约 65页
2018-09-09 发布于上海
举报
版权申诉

猪ifnα融合ppv vp2pcv2 orf2基因真核表达载体构建及免疫原性研究-construction and immunogenicity of porcine ifn α fusion ppv p2p cv 2 or f2 gene eukaryotic expression vector.docx

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

猪ifnα融合ppv vp2pcv2 orf2基因真核表达载体构建及免疫原性研究-construction and immunogenicity of porcine ifn α fusion ppv p2p cv 2 or f2 gene eukaryotic expression vector

中文摘要啊!!4441出干扰素 (int町齿。n ，IFN) 是病毒或干扰素诱生剂(In terferon inducer) 进入动物机体后诱导宿3:细胞产生的微量并具有广谱抗病毒和免疫调节等多种生物活性的一类细胞因子。猪 α 干扰素 (PoIFN- a )可被用于免疫增强剂和猪病毒病的泊疗。为探索PoIFN-α 作为分子佐剂对核酸疫苗的免疫增强作用，本研究应用 PCR技术从太湖猪肝脏基因组中扩增得到太湖猪 IFN-a 基因CDS区全序列，对其进行序列测定，然后将太湖猪 IFNα 插入到 pCI.VP2-0RF2 质粒中，构建了融合表达载体 PCI.IFN-α -ORF2-VP2 。将该质粒转染PK15细胞后运用间接免疫荧光对 PCV2 的ORF2蛋白和PPV VP2蛋白进行检测。并以 BALAlc小鼠为动物模型，分别运用 pCI-IFN.a-ORF2- VP2、 pCI-VP2-0盯2.. pCI空载体、猪细小病毒灭活疫苗、猪困环病毒亚单位疫苗通过肌注进行免疫，并于 14天进行加强免疫。免疫后来集小鼠脾脏、外周血，运用 MTT 比色法、流式细胞术和 ELISA法检测了免疫小鼠牌脏淋巴细胞的转化功能、外周血中 CD4+和CD8+ 淋巴细胞比例以及时 V2和PPV抗体效价。结果显示:太湖猪 IFNα 基因在编码区具有三处突变，其中两处错义突变导致了编码氨基酸的改变。重组质 pCI.IFN-a-ORF2- VP2转染PK后48小时运用间接免疫荧光可以检测到PCV20盯2和PPVVP2 蛋白的表达。运用该质粒免疫小鼠后能诱导小鼠产生良好的免疫应答，且重组·质粒 pCI.IFN-α-ORF2-VP2 诱导的细胞免疫水平和 PPVIPCV2 抗体效价在二免后均高于成显著高于细小病毒灭活商组、因环疫苗组和 O盯2NP2组。这一结果表明 PolFNα 可以显著增强PCV2IPPV工联核酸疫苗的免疫放力，为进一步研制安全高效的 PPV和PCV2基因工程多价疫苗提供了科学依据。关键词:猪 IFN- a ;猪细小病毒: VP2基因; 猪圆环病毒 2型; ORF2基因:建组质粒:基因疫苗:免疫效力 Abstract Construction and immunogenicity study of fusion eukaryotic expression vector of porcine IFN-a gene，PPV VP2 and PCV2 ORF2 gene 丁an Rong(Preventive Veterinary Medcine) Directed by Prof. Wang Yin (Sichuan Agriculture University，Yaan，Sichuan，P.R.China ，625014) Interfron was a kind of cytokine wi也 Broadspectrum antiviral and immunoregulation activity，gene阳lIy，it secretes by host cell when invaded by interferon ._ inducer. Previous research shown that porcine interferon a can be us创制 immunopotentiator of vaccine and medicine of porcine virus disease. With the increasing development of genetic engineering technology，more and mo附阳di部 focus on the appli佣tion of porcine int町feron a as a cytokine adjuvant， and develop new DNA vaωne with recombinant IFN-a gene. Uti1izing technique of PCR and s叫uencing，the nucleotide and deduced atnino acid S叫uence of the porcine IFNa gene w叮e obtained in 也is study. Three nucleotide mutations in CDS region w阴阳叫ed， two of them are missense mutations. Fusion expression expression vecto