重组人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子凝胶对大鼠深ⅱ度烫伤创面愈合的实验研究-experimental study of recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor gel on wound healing in rats with deep second degree burn.docxVIP

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子凝胶对大鼠 深Ⅱ度烫伤创面愈合的实验研究 研究生：丁晓斌 导师：郭力 教授 中文摘要 目的：通过建立大鼠深Ⅱ度烫伤模型，观察外用重组人粒细胞-巨噬细 胞集落刺激因子（rhGM-CSF）凝胶与外用碘伏纱布包扎治疗对实验性深Ⅱ 度烫伤动物的疗效比较，探讨重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子凝胶对 深Ⅱ度烫伤创面的影响及促进创面愈合的作用机制。方法：1.模型制作： 将 40 只 SD 大鼠随机分为实验组和对照组，每组为 20 只，平均体重在（250 ±25）g，雌雄不限。将 SD 大鼠称重后以 0.3%戊巴比妥钠（1ml/100g）腹 腔注射麻醉，麻醉起效后于背部用 6%硫化钠脱毛。24h 后以 0.3%戊巴比妥 钠（1ml/100g）腹腔注射麻醉。所有大鼠均采用同样的烫伤条件。选用一 块大小为 22cm×11cm 的木板，中间制作一个 5cm×6cm 的长方形孔，将大 鼠取仰卧位四肢固定于木板上，使其背部脱毛区皮肤暴露于木板孔内，然 后将木板置于热水温度为 80℃的电热恒温水浴锅上，轻度按压木板使背部 脱毛区皮肤浸泡在热水里，按压 15s 后迅速将木板离开水面即造成大鼠背 部深 II 度烫伤，深度经组织学证实。烫伤后用干纱布揩干受伤区，在腹腔 内注射 5ml0.9%生理盐水进行复苏。实验组将重组人粒细胞-巨噬细胞集落 刺激因子凝胶均匀涂抹于创面上，厚度约 1mm，先用一层凡士林纱布覆盖， 再用 3-4 层无菌纱布包扎，纱布外用胶布缠绕固定；对照组先将 0.5%强力 碘溶液用 0.9%生理盐水稀释 10 倍配成 0.5?碘溶液，然后将浸有 0.5?碘 溶液的纱布覆盖创面，外用 3-4 层无菌纱布包扎，纱布外用胶布缠绕固定。 PAGE PAGE 10 每天给药 1 次，连续用药 13 天；分别在给药后第 4 天、7 天、10 天、13 天，每组随机选取 5 只 SD 大鼠处死。2.创面大体观察：每天下午 16 时观 察并记录实验组创面与对照组创面的痂壳形成与脱落情况、分泌物的情况 以及创缘反应等。3.创面愈合率（WHR）计算：在用药前用透明方格纸描出 所有 SD 大鼠烫伤创面的图形并计算出该图形的面积，即为用药前的创面面 积；在给药后第 4 天、7 天、10 天、13 天，用透明方格纸描出每组被随机 选取的 5 只 SD 大鼠处死后的创面图形并计算出该图形的面积，即为用药后 的创面面积，并将用药前创面的面积减去用药后创面的面积比用药前创面 的面积，即创面愈合率（wound healing rate,WHR）。4.成纤维细胞（FB） 计数:在给药后第 4 天、7 天、10 天、13 天，实验组和对照组各随机选取 5 只 SD 大鼠处死，在创面中央进行创面取材，将烫伤创面皮肤全层完整取出 后置于 4%多聚甲醛液中固定。24h 后，将试验所取组织进行逐级酒精脱水 （75%→85%→95%→100%），用二甲苯将脱水后标本透明两次，石蜡包埋、 切片，并行 HE 染色，在光镜下观察实验所取组织，随机法取 5 个视野，于 400 倍镜下观察，计数成纤维细胞，取其平均值。5.创面微血管密度（MVD）： 以抗血管Ⅷ因子抗体对标本进行免疫组织化学染色，对实验组和对照组在 烫伤后第 4 天、7 天、10 天、13 天的实验所取组织的病理切片进行显微镜 下观察并选取 5 个连续而不重叠的视野进行微血管计数，对比各组切片中 微血管数量的差异。6.创面胶原纤维的阳性面积计算：对实验组和对照组 实验所取组织标本进行 Masson 三色胶原染色，在光镜下观察烫伤后第 4 天、7 天、10 天、13 天创面中胶原的含量，并在创面中心随机法取 5 个视 野，与 400 倍镜下用 Image-Pro Plus 图像分析软件，测定胶原纤维的阳性 面积。结果：1.创面大体观察：实验组创面和对照组创面经两种不同治疗 方法处理后，两组的烫伤创面均随时间延长而逐渐缩小，其中实验组创面 结痂速度、脱痂速度较对照组快，对照组创面分泌物相对较多，部分呈脓 性分泌物；对照组创缘红、肿等创缘反应持续时间明显较实验组长。2.创 面愈合率：实验组和对照组烫伤创面面积均随时间延长而逐渐缩小。在大 鼠烫伤后第 4 天的创面愈合率均呈轻度增长，实验组和对照组分别为：5.39 ±0.45 和 4.92±0.69，两者比较差异性无统计学意义（P0.05），；在烫伤 后第 7 天、10 天、13 天，实验组创面愈合率分别为：17.54±1.49、27.67 ±1.00、52.40±4.84；而对照组创面愈合率分别为：11.48±0.80、15.59 ±0.50、31.91±2.67，两者比较差异性有统计学意义（P0.05），