滋补肝肾复方对mcao大鼠rhorock信号通路的作用研究-effect of nourishing liver and kidney compound on rho rock signal pathway in mcao rats.docxVIP

目 录 引 言 1 第一部分 实验研究 2 实验一 实验材料与方法 2 一、实验材料 2 （一）实验动物 2 （二）实验药物 2 （三）主要试剂 2 （四）主要仪器 4 二、实验方法 6 （一）分组方法 6 （二）观察疗程 7 （三）造模方法 7 （四）给药方法 9 （五）样本含量 9 （六）标本制备 10 （七）图像分析 10 （八）统计学方法 10 HYPERLINK \l _TOC_250002 实验二 复健片对 MCAO 大鼠缺血性脑血管病周围组织 RhoA 表达的影响 11 一、实验对象与材料 11 二、研究方法 11 HYPERLINK \l _TOC_250001 实验三 复健片对 MCAO 大鼠缺血性脑血管病周围组织 ROCK2 表达的影响 24 一、实验对象与材料 24 二、研究方法 24 HYPERLINK \l _TOC_250000 实验四 复健片对 MCAO 大鼠缺血性脑血管病周围组织 MLCP 表达的影响 37 一、实验对象与材料 37 二、研究方法 37 第二部分 讨 论 50 一、中医对中风的认识沿革 50 二、病因病机 50 三、治法 51 （一）补气活血 51 （二）健脾益气 51 （三）清热化痰 51 （四）滋补肝肾 52 四、组方依据 52 五、方药现代药理研究概要 53 （一）何首乌 54 （二）桑寄生 54 （三）草决明 55 （四）海马 55 （五）淫羊藿 55 六、现代医学对中风脑损伤的认识 56 （一）脑损伤的相关机制 56 （二）中风脑神经损伤方面 57 七、实验注意的问题 59 结 语 60 参考文献 61 综 述 63 致 谢 69 科研课题 70 1 1 引 言 随着致病因素变化，脑血管疾病发病率呈逐年上升趋势，我国脑血管疾病中，缺 血性脑血管病占一半以上。目前，国内外对缺血性脑血管病的研究主要集中于缺血后 神经保护和神经再生研究，许多神经保护药物临床研究结果亦不尽如人意。因此，大 多数缺血性脑血管病患者的神经元死亡仍不可避免，如何积极有效地促进神经再生成 为当前亟待解决的重要课题。缺血性脑血管病属于中医中风的范畴，中医药治疗本病 具有独特的临床优势，但缺乏深层作用机制研究。中医学认为缺血性脑血管病病因繁 多，病机复杂，但从病因、发病机理、病理变化、临床症状及治疗经验推断其关键病 机是阴常不足、肝肾阴虚。 肝肾阴虚贯穿于中风的整个病理过程，故滋补肝肾可用于作为治疗中风的根本大 法。滋补肝肾法是指用滋肾药物以润养肝阴，即滋水涵木法，来治疗肝肾阴亏、肝木 旺证侯的一种治法。滋补肝肾可使肾精充足，脑髓得养，神机得复，若肝肾充足，则 筋骨得以濡养，肢体功能得以恢复，滋补肝肾复方复健片是以此理论为指导的经验方。 本实验研究是基于导师长期以来对复健片治疗中风研究的深入，且在前期研究工 作中，已经对复健片进行了大量临床研究和实验研究，结果表明，复健片可改善患者 的神经功能缺损评分、日常生活活动能力、智能状况，对缺血性卒中患者临床症状具 有较好的疗效。先前大量的实验研究亦表明，复健片有以下作用：保护神经元，使皮 质、尾状核及海马区域中缺血性神经元数量减少，受损程度减轻，表现为胞浆轻度染 色及轻度皱缩，但细胞核及核仁仍清楚可见，未见细胞周围间隙明显增宽；改善胰岛 素抵抗状态，改善血液流变学状态，增加梗死周围组织及对侧的局部脑血流；干预缺 血性卒中的病理过程，具有抗自由基损伤作用。实验研究采用成年 SPF 级雄性 Sprague-Dawley （SD）大鼠，建立 MCAO 模型，分正常对照组、假手术组、模型组 和药物组共四个大组，运用免疫组织化学、Western blotting 等方法从免疫病理、蛋 白水平上研究各组大鼠梗死区周围 RhoA、ROCK2、MLCP 的表达，旨在观察复健片 对 MCAO 大鼠神经再生 Rho/ROCK 信号通路的影响，以进一步探讨其促进神经再生 的作用机制。 PAGE PAGE 2 第一部分 实验研究 实验一 实验材料与方法 一、实验材料 （一）实验动物 成年 SPF 级雄性 Sprague-Dawley （SD）大鼠 60 只，体重 250~300g，由山东中 医药大学实验动物中心提供，实验动物生产许可号：SCXK（鲁山东省 科学技术厅发），实验动物质量合格证号：鲁动质号 0005215（山东省实验动物管理 委员会发），检疫后备用，自由摄食进水。颗粒大鼠饲料，由济南康大饲料与山东省 实验动物中心联合生产，许可证号：鲁饲准字 364 号。实验过程中动物饲养及取材均 遵守实验动物管理和保护的有关规定。 （二）实验药物 复健片，主