潮汕食管癌o6-甲基鸟嘌呤-dna甲基转移酶基因多态性及其表达与p53之间关系的初步分析-preliminary analysis of o6 - methylguanine - dna methyltransferase gene polymorphism and its expression in chaoshan esophageal cancer and its relationship with p53.docxVIP

汕头大学医学院硕 汕头大学医学院硕士学位论文 PAGE PAGE 5 标本来源： 1. 潮汕地区人群外周血标本提取：收集汕头大学医学院第一附属医院胸外科手 术治疗的潮汕食管癌患者血样 100 例和同一地区的健康志愿者外周血血样 65 例， 采用赛百胜公司的聚合酶链反应纯化试剂盒提取基因组 DNA。所有病例均经组织 病理学诊断证实,全部为食管鳞状细胞癌。 2. 食管癌手术切除标本：收集 2004.4-2005.10 期间汕头大学医学院病理教研室 病理科食管癌手术切除新鲜标本 55 例；2003.10-2005.5 年间汕头大学医学院病 理教研室收集的 148 例食管癌手术切除标本制作的含有不同食管组织的芯片三 张。另收集 12 例非食管疾病病理尸体解剖病例正常食管粘膜和胚胎食管粘膜。 标本的分组及组成：正常上皮 21 例、单纯增生上皮 39 例、非典型增生 17 例、 原位癌 12 例、浸润癌 140 例。 研究方法： 1. 学习制作基因 PCR 扩增产物 DNA 生物样本芯片。 2. 应用双色荧光杂交技术，检测潮汕地区食管鳞状细胞癌患者及对照外周血 MGMT 基因第 84 位密码子（C2740214T）、143 位密码子（A2798995G）和 160 位密码子（G2799046A）单核苷酸多态性。 3. 应用免疫组织化学 EnVision 二步法检测 MGMT 和 p53 蛋白表达的情况。 结果 基因芯片杂交的结果 基因型分布符合 Hardy - Weinberg 定律。统计分析显示食管鳞状细胞癌组 与对照组 84 位密码子 2740214C 和 2740214T 等位基因频率差异无统计学意义 (P=0.402)，2740214CT 基因型在病例组和对照组中所占的比例分别为 16％和 12.3％，2740214TT 基因型在病例组中所占的比例是 2％。食管鳞状细胞癌组变 异基因型拥有者(CT+TT)高于对照组，但差异无统计学意义(P=0.327)，2740214TT 基因型仅见于个别肿瘤患者，而在正常对照中未发现。143 位密码子 A2798995G 位点仅在对照组中发现一例杂合子，其余均为野生型纯合子，病例组与对照组基 因型和等位基因频率差异均无统计学意义。160 位密码子 G2799046A 位点在所有 的病人和对照中均为野生型纯合子。 MGMT、p53 免疫组织化学染色结果 免疫组织化学染色结果显示,食管组织 MGMT 和 p53 蛋白阳性均定位于细胞核,食 管不同类型组织 MGMT、p53 表达不同.MGMT 在正常上皮表达较弱,从单纯增生上 皮、非典型增生上皮表达逐渐增强，阳性细胞主要位于上皮的基底部;在原位癌 组织 MGMT 表达强度最强。统计结果显示各种类型食管组织间 MGMT 表达强度存在 差异(F=3.022, P0.05)。但是，各种类型食管组织 MGMT 阳性率之间没有明显差 异(P0.05)。p53 在正常上皮不表达,从单纯增生上皮到非典型增生上皮表达增 强，阳性细胞主要位于基底细胞层和棘细胞层,在原位癌和浸润癌组织中表达强 度最强,阳性表达率也最高，阳性细胞多弥散分布于整个癌巢.统计结果显示 p53 在各种类型食管组织间表达强度存在明显差异(F=16.18, P0.01),阳性率也存 在明显差异(F＝10.568， P0.01)。MGMT 和 p53 的相关分析结果显示，在食管癌 组织中 MGMT 表达与 p53 表达呈明显的负相关 (rs＝-0.415， P?0.01)。 结 论 1. 潮汕地区食管鳞状细胞癌患者和正常人群中存在 MGMT 基因多态性，84 位 密码子 C2740214T 位点的突变型纯合子仅见于个别肿瘤患者，143 位密码子 A2798995G 位点仅在对照组中发现一例杂合子，160 位密码子 G2799046A 位点在 所有检测标本中均为野生型纯合子。 2. 在食管上皮癌变过程中，MGMT表达强度逐渐增高，其中在非典型增生组 织和原位癌组织表达最高。MGMT的阳性率在不同的食管组织中无明显差别。 3. 在食管上皮癌变过程中，食管组织 p53 表达强度和阳性率均增高, 其中在 癌组织中表达最高。 4. 相关分析发现：在食管癌组织中 MGMT 表达与 p53 表达呈负相关。 潮汕地区食管鳞状细胞癌患者和正常人群中存在 MGMT 基因多态性，第 84 位 密码子 2740214TT 基因型仅见于个别肿瘤患者,但尚须扩大样本进一步深入研 究。MGMT 和 p53 在食管组织癌变的过程中的表达改变可能与食管癌发生有关; MGMT 与 p53 在癌组织中的表达呈负相关关系，癌组织中突变型 p53 蛋白表达增 高而 MGMT 表达下降，可能存在两种 MGMT 与 p5