肝水解肽注射液中亚硫酸氢钠含量测定方法的研究.docVIP

肝水解肽注射液中亚硫酸氢钠含量测定方法的研究 　　【摘 要】目的：建立紫外-分光光度法测定肝水解肽注射液中亚硫酸氢钠的含量。方法：利用亚硫酸氢根与EDTA2-在酸性条件下，与甲醛和碱性品红作用，生成紫色复合物，在555nm处测定吸光度，以此计算亚硫酸氢钠含量。结果：亚硫酸氢钠浓度在0.2～8.0（*0.6391）μg?ml-1范围内与吸光度呈良好线性关系，其线性方程为A=0.507C+0.2745， r=0.9992。用厂家样品进行加样回收试验，回收率在98%以上，RSD小于0.7%（n=6）。结论：该方法稳定，简便易行，快速准确。 　　【关键词】分光光度法；亚硫酸氢钠；肝水解肽注射液 　　肝水解肽注射液是临床上广泛用于促进肝细胞增殖的药品，收集到的多家药品处方中显示添加了亚硫酸氢钠。亚硫酸氢钠是一种药用辅料[1]，常作为抗氧剂添加于各种药物制剂中以提高药品制剂的稳定性，然而临床上多有报道注射液中亚硫酸氢钠对患者肝功能有影响[2-3]，导致转氨酶升高，严重的可能引起肝细胞坏死。因此对亚硫酸氢钠在注射剂中加入量进行检测和控制，是加强药品质量监管，提高肝水解肽注射液用药安全的重要手段。为最大限度地控制肝水解肽注射液中亚硫酸氢钠的用量，减少不良反应，本文参考文献[4-5]建立了比色法测定肝水解肽注射液中亚硫酸氢钠的含量，利用亚硫酸氢根在EDTA2-存在的酸性条件下，与甲醛及碱性品红作用，生成紫色复合物，在反应完成后于560nm处测定反应液吸光度。根据标准品吸光度拟合的标准曲线计算测定肝水解肽注射液的亚硫酸氢钠含量。经试验，肝水解肽注射液中其他成分对亚硫酸氢钠测定无干扰，该方法简便易行，准确度、精密度均令人满意，可作为肝水解肽注射液质量控制的重要手段。 　　1 仪器与试药 　　CARY 100型分光光度计（瓦里安公司）：亚硫酸氢钠为分析纯，其亚硫酸氢钠含量经标定为63.91%；盐酸、甲醛、乙二胺四乙酸二钠为分析纯；碱性品红为分析纯；水为超纯水；肝水解肽注射液5个厂家样品共11个批次。 　　2 试验方法的研究和测定 　　2.1 测定波长的选择 　　精密称取亚硫酸氢钠适量，加0.01%EDTA-Na2溶液溶解并稀释成每1ml中约含亚硫酸氢钠2.58μg的溶液：精密量取该溶液10ml，0.05%碱性品红溶液1ml与0.2%甲醛溶液1ml，置25ml比色管内，盖上管塞，摇匀，室温放置20分钟，在200nm～800nm范围进行扫描，测得吸光度值在550～560nm范围内较好且较稳定，故选择555nm为测定波长。 　　2.2 本底干扰考察 　　按各厂家处方，配制扣除亚硫酸氢钠的肝水解肽本底溶液，照“测定波长选择”项下方法显色后于555nm测得吸光度，与相同显色方法的空白试液比较吸光度。结果表明，肝水解肽注射液中各主药及其它辅料对本试验测定结果无影响。 　　2.3 显色反应所用试剂浓度选择 　　2.3.1 亚硫酸氢钠对照液的制备 　　取亚硫酸氢钠适量，精密称定，加0.01%EDTA-Na2水溶液制成每1ml约含100μg的溶液，精密量取适量，用0.01%EDTA-Na2溶液稀释成浓度约为0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0（*0.6391）μg?ml-1的系列亚硫酸氢钠对照液。 　　2.3.2 碱性品红溶液制备 　　取碱性品红0.05g置100ml量瓶中，加盐酸5ml溶解，加水至刻度，摇匀。 　　1）碱性品红溶液浓度选择 　　在甲醛溶液浓度为0.2%的条件下，分别取0.01%与0.05%碱性品红水溶液别与系列亚硫酸氢钠对照液进行显色反应，将测得吸光度与浓度作线性关系考察，结果见表1与表2。结果表明，在0.05%碱性品红溶液条件下，亚硫酸氢钠对照液的线性关系优于0.01%碱性品红溶液，故碱性品红溶液浓度选择为0.05%。 　　表1 0.05%的碱性品红与0.2%的甲醛溶液的线性结果 　　表2 0.01%的碱性品红与0.2%的甲醛溶液的线性结果 　　2）盐酸加入量选择 　　取碱性品红0.05g三份，分别用盐酸2ml、5ml、8ml溶解，加水至刻度，摇匀。分别与亚硫酸氢钠浓度对照液（0.5μg?ml-1）进行显色反应，考察盐酸加入量与显色反应关系。结果表明，加入5ml或8ml的盐酸均可保证吸光度落在0.3～0.7的最佳定量范围内，但考虑到试验操作的简便性，最终盐酸加入量选择为5ml。 　　表3 不同体积盐酸加入量测得的吸光度 　　2.4 显色时间 　　精密量取0.5μg?ml-1的亚硫酸氢钠对照液10ml、0.05%碱性品红溶液1ml与0.2%甲醛溶液1ml，置于25ml比色管内，盖上管塞，摇匀，分别在室温下放置10、20、25、30、35、40、50分钟后测定显色液的吸光度。结果发现，