中华蜜蜂AccCYP336A1和AccCYP18A1基因的分离与表达特性分析-Isolation and Expression Characteristics of ACC CYP 336A1 and ACC CYP 18A1 Genes from Apis cerana cerana.docxVIP
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中华蜜蜂AccCYP336A1和AccCYP18A1基因的分离与表达特性分析-Isolation and Expression Characteristics of ACC CYP 336A1 and ACC CYP 18A1 Genes from Apis cerana cerana
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保密论文在解密后应遵守此规定。
论文作者签名:
导 师 签 名:
日 期:
符 号 说 明
Amp: Ampicillin, 氨苄青霉素
ddH2O: Distilledant deionized water, 重蒸水
DEPC: Diethyl pyrocarbonate, 焦碳酸二乙酯
dNTP: Deocyribonucleoside triphosphate, 脱氧核糖核苷三磷酸
EB: Ethidium bromide, 溴化乙锭
EDTA: Ethylene diamine tetraacetic acid, 乙二胺四乙酸
ELISA: Enzyme linked immunosorbent assay, 酶联免疫吸附实验
HEM: Ferroheme, 亚铁血红素
IPTG: Isopropyl-β-D-thiogalactoside, 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷
Kan: Kanamycin, 卡那霉素
LB: Luria-bertani medium, LB 培养基
NADP+: Oxidized triphosphopyridine nucleotide, 氧化性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸
NADPH: Triphosphopyridine nucleotide, 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸
P450: Cytochrome P450, 细胞色素 P450 PBO: Piperonyl butoxide, 胡椒基丁醚 PBS: Phosphate buffer, 磷酸缓冲液
qRT-PCR: Real time quantitative reverse transcerption PCR, 实时定量反转录 PCR RNaseA: Ribonuclease A, 核糖核酸酶 A
ROS: Reactive oxygen species, 活性氧
RT-PCR: Reverse transcriptative PCR, 反转录 PCR TE: Tris·HCl, EDTA buffer, Tris·Cl, EDTA 缓冲液
目录
中文摘要 1
Abstract 3
1 前言 5
1.1 中华蜜蜂的生物学特征及重要地位 5
1.2 动物氧化还原体系 6
HYPERLINK \l _TOC_250000 1.3 细胞色素 P450 氧化酶 8
1.3.1 细胞色素 P450 氧化酶的命名 8
1.3.2 细胞色素 P450 氧化酶的结构 9
1.3.3 细胞色素 P450 氧化酶的分布 10
1.3.4 细胞色素 P450 氧化酶的分类 11
1.3.5 细胞色素 P450 氧化酶的功能 11
1.4 本研究的目的及意义 15
2 材料与方法 16
2.1 实验材料 16
2.1.1 蜜蜂材料 16
2.1.2 菌株与质粒 16
2.1.3 酶与各种生化试剂 16
2.1.4 PCR 引物 16
2.2 实验方法 18
2.2.1 中华蜜蜂的饲养及处理 18
2.2.2 中华蜜蜂总 RNA 的提取、纯化及鉴定 18
总 RNA 的提取 18
总 RNA 的纯化 19
总 RNA 的琼脂糖-甲醛变性凝胶电泳鉴定 19
cDNA 第一链合成 20
cDNA 的纯化 20
2.2.5 cDNA5末端的加尾反应 20
2.2.6 中华蜜蜂 AccCYP336A1 及 AccCYP18A1 基因 cDNA 全长序列的获取 21
AccCYP336A1 及 AccCYP18A1 基因中间片段的获取 21
RACE 法获得 AccCYP336A1 及 AccCYP18A1 基因 5端序列 21
RACE 法获得 AccCYP336A1 及 AccCYP18A1 基因 3端序列 22
AccCYP336A1 及 AccCYP18A1 基因全长 cDNA 序列的获得 23
2.2.7 目的 DNA 片段回收、连接及转化 24
目的 DNA 片
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