中华蜜蜂AccCYP336A1和AccCYP18A1基因的分离与表达特性分析-Isolation and Expression Characteristics of ACC CYP 336A1 and ACC CYP 18A1 Genes from Apis cerana cerana.docxVIP

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中华蜜蜂AccCYP336A1和AccCYP18A1基因的分离与表达特性分析-Isolation and Expression Characteristics of ACC CYP 336A1 and ACC CYP 18A1 Genes from Apis cerana cerana

万方数据 万方数据 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文,是在导师指导下,独立进行科学研究所取得 的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体, 均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定,同意学 校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版,允许论 文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存 论文和汇编本学位论文,同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文 收录到《中国学位论文全文数据库》,并向社会公众提供信息服务。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名: 导 师 签 名: 日 期: 符 号 说 明 Amp: Ampicillin, 氨苄青霉素 ddH2O: Distilledant deionized water, 重蒸水 DEPC: Diethyl pyrocarbonate, 焦碳酸二乙酯 dNTP: Deocyribonucleoside triphosphate, 脱氧核糖核苷三磷酸 EB: Ethidium bromide, 溴化乙锭 EDTA: Ethylene diamine tetraacetic acid, 乙二胺四乙酸 ELISA: Enzyme linked immunosorbent assay, 酶联免疫吸附实验 HEM: Ferroheme, 亚铁血红素 IPTG: Isopropyl-β-D-thiogalactoside, 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 Kan: Kanamycin, 卡那霉素 LB: Luria-bertani medium, LB 培养基 NADP+: Oxidized triphosphopyridine nucleotide, 氧化性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 NADPH: Triphosphopyridine nucleotide, 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 P450: Cytochrome P450, 细胞色素 P450 PBO: Piperonyl butoxide, 胡椒基丁醚 PBS: Phosphate buffer, 磷酸缓冲液 qRT-PCR: Real time quantitative reverse transcerption PCR, 实时定量反转录 PCR RNaseA: Ribonuclease A, 核糖核酸酶 A ROS: Reactive oxygen species, 活性氧 RT-PCR: Reverse transcriptative PCR, 反转录 PCR TE: Tris·HCl, EDTA buffer, Tris·Cl, EDTA 缓冲液 目录 中文摘要 1 Abstract 3 1 前言 5 1.1 中华蜜蜂的生物学特征及重要地位 5 1.2 动物氧化还原体系 6 HYPERLINK \l _TOC_250000 1.3 细胞色素 P450 氧化酶 8 1.3.1 细胞色素 P450 氧化酶的命名 8 1.3.2 细胞色素 P450 氧化酶的结构 9 1.3.3 细胞色素 P450 氧化酶的分布 10 1.3.4 细胞色素 P450 氧化酶的分类 11 1.3.5 细胞色素 P450 氧化酶的功能 11 1.4 本研究的目的及意义 15 2 材料与方法 16 2.1 实验材料 16 2.1.1 蜜蜂材料 16 2.1.2 菌株与质粒 16 2.1.3 酶与各种生化试剂 16 2.1.4 PCR 引物 16 2.2 实验方法 18 2.2.1 中华蜜蜂的饲养及处理 18 2.2.2 中华蜜蜂总 RNA 的提取、纯化及鉴定 18 总 RNA 的提取 18 总 RNA 的纯化 19 总 RNA 的琼脂糖-甲醛变性凝胶电泳鉴定 19 cDNA 第一链合成 20 cDNA 的纯化 20 2.2.5 cDNA5末端的加尾反应 20 2.2.6 中华蜜蜂 AccCYP336A1 及 AccCYP18A1 基因 cDNA 全长序列的获取 21 AccCYP336A1 及 AccCYP18A1 基因中间片段的获取 21 RACE 法获得 AccCYP336A1 及 AccCYP18A1 基因 5端序列 21 RACE 法获得 AccCYP336A1 及 AccCYP18A1 基因 3端序列 22 AccCYP336A1 及 AccCYP18A1 基因全长 cDNA 序列的获得 23 2.2.7 目的 DNA 片段回收、连接及转化 24 目的 DNA 片

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