指纹图谱结合一测多评模式在中药鱼腥草质量评价中应用研究.docVIP

指纹图谱结合一测多评模式在中药鱼腥草质量评价中应用研究 　　[摘要] 研究中药质量评价中指纹图谱与一测多评结合的考察模式，以中药鱼腥草为研究对象，以绿原酸为参照物建立鱼腥草HPLC指纹图谱及其与其余成分的相对校正因子，并计算其含量，实现一测多评。同时采用外标法测定该7个成分的含量，并比较二者的差异，以验证一测多评法的准确性和可行性。结果建立了鱼腥草HPLC特征指纹图谱共有模式，标定了12个共有峰，指认了其中7个共有峰，20批鱼腥草的相似度在0.912～0.991。20批鱼腥草中7个成分的计算值与实测值间无显著差异。结果表明一测多评结合指纹图谱的质量控制模式在鱼腥草中得到验证，有望成为适合中药特点的质量评价模式。 　　[关键词] 指纹图谱；一测多评；质量控制；鱼腥草；高效液相色谱 　　[收稿日期] 2013-03-11 　　[基金项目] 泸州市2010年重点科技项目（泸市财企[2010]41号）；泸州医学院2010年青年基金项目（泸医院[2010]108号） 　　[通信作者] *杨世艳，主要从事中药纳米脂质超声微泡的研制，TelE-mail：lyysy2010@126.com 　　[作者简介] 何兵，副研究员，主要从事中药活性成分及质量分析研究，TelE-mail：lyhb2008@126.com 中药质量控制和评价是中药现代化的瓶颈，中药多成分的复杂性决定了传统的单一成分或单指标评价难以表达中药的质量[1]，近年提出了一些新的质量评价方法[2-4]，但应用最为广泛的为两类，一类是多指标成分的同时测定[5]，另一类是反映中药化学成分整体模糊信息的指纹图谱方法[6]。指纹图谱偏于定性，虽然其模糊性能反映药材整体成分信息，但具体是什么，含量多少均无法明确，故其模糊性特点导致了在实际生产、监督中“难以说清楚”的局面。多指标的质量评价模式，必须有足够量的化学对照品。由于中药化学对照品分离难度大，单体不稳定难以供应或供应价格高等因素，致使对照品的供应和使用力不从心。王智民等[7]提出了一测多评法的质量控制模式，解决了一些对照品制备困难、价格昂贵、不稳定或难以获得的难题。但由于中药特别是中成药的复杂性，在多指标成分同时测定中也并非所有活性成分均能定量，可见指纹图谱和一测多评二者均有优势也有不足，若能将二者结合以指纹图谱定性，以一测多评定量则能互为补益，更全面科学的评价中药的质量。 　　实验以鱼腥草（干品）为研究对象，在建立了鱼腥草 HPLC 指纹图谱的同时，标定了其中7个含量较高的活性成分（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷及槲皮苷），并采用一测多评法测定了其含量。实验将指纹图谱技术和一测多评含量测定技术相结合，为鱼腥草药材质量控制和评价提供了更好的技术手段，也为鱼腥草的质量标准提高研究提供科学依据。 　　1 材料 　　Dionex高效液相色谱仪（包括P680A四元梯度泵，PDA-100二极管阵列检测器，TCC-100柱温箱和Chromeleon色谱工作站）。Agilent 1100高效液相色谱仪（包括G1311A四元泵、G1313A自动进样器、G1315B二极管阵列检测器、G1316A柱温箱和Agilent ChemStation工作站）。色谱柱：AkzoNobel Kromasil C18，Lubex Kromasil C18，Phenomenex Luna C18（2），Dikma Platisil ODS（均为4.6 mm×250 mm，5 μm）。瑞士Precisa电子天平（XR 205SM-DR，1/10万）。CQX25-06 超声波清洗器（上海必能信超声有限公司，250 W，25 kHz）。 　　新绿原酸（批号070915）、绿原酸（批号080620）、隐绿原酸（批号080923）、芦丁（批号090618）、金丝桃苷（批号090802）、槲皮苷（批号091205）及异槲皮苷（批号091226）对照品均由成都曼思特有限公司提供。所有对照品经HPLC峰面积归一化法检测纯度均在98%以上。 　　鱼腥草，采自四川省泸州市各乡镇及宜宾、安岳，另有3批为市售，经泸州医学院田吉研究员鉴定，均为三白草科植物蕺菜 Houttuynia cordata Thunb.的新鲜全草，50 ℃烘干备用。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 分析方法验证 　　2.1.1 色谱条件 AkzoNobel Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脱0～10 min，6%～8%A，10～35 min，8%～27%A，35～37 min，27%