嗜酸乳杆菌ATCC4356分选酶A基因克隆表达及功能分析-食品科学.PDF

76 2018, Vol.39, No.04 食品科学 ※生物工程 嗜酸乳杆菌ATCC4356分选酶A基因克隆、 表达及功能分析 1 1 1 1,* 1,2,* 1 2 吴 京 ，王文文 ，熊蓉露 ，吴 振 ，潘道东 ，曾小群 ，郭宇星 （1.宁波大学 浙江省动物蛋白食品精深加工技术重点实验室，浙江 宁波 315211 ； 2.南京师范大学金陵女子学院，江苏 南京 210097 ） 摘  要：分选酶在细菌对宿主细胞的黏附过程中具有重要作用。为探究乳酸菌分选酶的特性及与其他致病菌分选 酶的差异，以嗜酸乳杆菌ATCC4356为模板，构建分选酶A （sortase A，SrtA ）重组表达载体pET28a-SrtAΔN48 ，转入 Transetta DE3 Dabcyl-QALPTTGEE Edans 大肠杆菌感受态细胞 （ ）内表达，使用 （ ）探究其酶活特性。结果发现：嗜 ATCC4356 SrtA Lap-SrtA 20 kDa Mg2 ＋ Zn2 ＋ Mn2 ＋ Lap-SrtA 酸乳杆菌 （ ΔN48）分子质量为 左右； 、 、 可提高 ΔN48的转肽能 力；Ca2 ＋不会影响SrtAΔN48的活性，明显区别于致病菌；且分选酶抑制剂查尔酮会抑制Lap-SrtAΔN48的活性。进一步 Lap-SrtA 8 β Lap-SrtA 通过蛋白质同源建模分析发现 由 条中心 桶状结构互相折叠而成，属于经典的分选酶结构， 的活 性位点为His137 、Cys198、Arg205 。 A 关键词：嗜酸乳杆菌；分选酶 ；基因克隆；酶学特性；结构特性 Cloning, Expression and Characterization of Sortase A from Lactobacillus acidophilus ATCC4356 1 1 1 1,* 1,2,* 1 2 WU Jing , WANG Wenwen , XIONG Ronglu , WU Zhen , PAN Daodong , ZENG Xiaoqun , GUO Yuxing (1. Key Laboratory of Animal Protein Food Deep Processing Technology of Zhejiang Province, Ningbo University,