改善水体和生物肠道菌群结构菌剂及其在罗非鱼养殖中应用.docVIP

改善水体和生物肠道菌群结构菌剂及其在罗非鱼养殖中应用 　　摘要：以蛭弧菌、光合细菌、乳酸链球菌、保加利亚乳杆菌、水产生物肠道有益菌作为1种微生物制剂，以泼洒的方式应用于罗非鱼养殖水体中，探究其对水产养殖环境、养殖生物肠道菌群结构、罗非鱼生长的影响。结果表明：与对照相比，革兰氏阴性、阳性菌群以及本土革兰氏阴性、阳性菌群数量均明显减少；与对照相比，试验组保加利亚乳杆菌、乳酸链球菌、光合细菌、有益菌数量均增加，本土微生物留下的生态灶由有益菌填补，维持了菌群平衡。该微生物制剂具有改善水体和生物肠道菌群结构以及促进养殖动物生长的作用。 　　关键词：有益菌；蛭弧菌；罗非鱼；菌群结构 　　中图分类号： S965.125 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0175-03 　　收稿日期：2013-08-01 　　基金项目：国家自然科学基金（编号。 　　作者简介：刘丽（1988―），女，湖北武汉人，硕士研究生，主要从事海洋微生物研究。E-mail：liuliliuwei@。 　　通信作者：蔡俊鹏，博士，教授，主要从事海洋微生物研究。Tel：（020E-mail：febjpcai@。目前，人类对动物性蛋白质的需求量急剧增加，水产养殖动物逐渐成为重要的动物蛋白来源[1]。为了预防水产养殖疾病并促进养殖动物生长，滥用抗菌药物、杀虫剂、消毒剂的现象越来越普遍[2]。为了促进水产养殖业的可持续发展，益生菌在水生动物养殖中的应用越来越多[3-4]。益生菌是一种对人体及动物有益的微生物膳食补充剂，能提高饲料的营养价值、抑制病原微生物生长、促进动物生长、增强动物免疫力[5]。Iebba等首次证实蛭弧菌是存在于人体中的一种有益微生物[6]。在水产养殖领域，与抗生素灭菌方法相比，利用蛭弧菌消除或者抑制致病菌更具有优越性[7]。乳酸菌、保加利亚乳杆菌也是常见的被用于水产养殖的益生菌[8]。光合细菌含有生物辅助因子，能提高鱼幼苗的存活率并促进鱼的生长[9]。本研究提供了1种能改善水体、生物肠道菌落结构菌剂的制备方法，并探讨其在罗非鱼养殖中的应用。该菌剂包括蛭弧菌（Bdellovibrio）菌液与有益菌菌液，其中有益菌菌液由光合细菌、乳酸链球菌（Streptococcus lactis）、保加利亚乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus）、水产生物肠道有益菌混合而成，水产生物肠道有益菌3y621是笔者所在实验室从罗非鱼肠道中分离出的蛋白酶高产菌株[10]。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　蛭弧菌BDF01由笔者所在实验室从海水中分离纯化而来。红假单胞菌（Rhodopseudomonas sp.）菌株编号1.2193，购于中国科学院微生物研究所。乳酸链球菌菌株编号 GIM1156、保加利亚乳杆菌菌株编号GIM1.8、嗜水气单胞菌菌株编号GIM1.172均购于广东省微生物研究所菌种保藏中心。水产生物肠道有益菌3y621是笔者所在实验室从罗非鱼肠道中分离出的蛋白酶高产菌株。试验地点：广东省湛江市某罗非鱼养殖场。 　　1.2培养基 　　优化的RCVBN培养基：3.0 g CH3COONa、1.0 g （NH4）2SO4、0.2 g MgSO4、1.0 g NaCl、0.3 g KH2PO4、0.5 g K2HPO4、0.05 g CaCl2、0.1 g酵母膏、1 mL微量元素溶液、1 000 mL 蒸馏水。微量元素溶液组成为：2 g EDTA-2Na、0.2 g FeSO4?7H2O、0.1 g MnSO4?4H2O、0.1 g H3BO3、0.1 g CoCl2?6H2O、0.1 g ZnCl2、0.02 g Na2MoO4?2H2O、0.02 mg NiCl2?6H2O、0.01 g CuCl2?2H2O、1 000 mL蒸馏水，pH值7.0～7.2。DNB液体培养基：营养肉汤0.8 g、酪蛋白酸水解物0.5 g、酵母提取物0.1 g、NaCl 30 g、1 000 mL蒸馏水，pH值7.2～7.6。LB液体培养基、营养肉汤（NB）、伊红美蓝琼脂（EMB）、甘露醇氯化钠琼脂培养基、MRS肉汤、叠氮血琼脂（Azide Blood）均购于广东环凯微生物科技有限公司。 　　1.3方法 　　1.3.1蛭弧菌菌液的制备采用高密度蛭弧菌游泳体发酵方法制备蛭弧菌菌液。制备的培养液于6 000 r/min 4 ℃离心20 min后取上清，再将上清液于16 000 r/min 4 ℃离心 20 min 后弃上清，加入DNB液体培养基重新悬浮蛭弧菌沉淀物，蛭弧菌浓度为1×105 PFU/mL。 　　1.3.2有益菌菌液的制备将红假单胞菌按1 g/L接种到优化的RCVBN液体