柑橘细胞电融合参数选择及种间体细胞杂种植株-中国科技论文在线.PDFVIP

植 　物 　学 　报 　1998 , 40 (5) :417～424 Acta Botanica Sinica 柑橘细胞电融合参数选择及种间 体细胞杂种植株再生 郭文武　邓秀新　史永忠 (华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室　武汉　430070) ( ) ( 摘要 　以“Page ”橘柚 Cit rus reticulata Blanco ×C. paradisi Macf 胚性悬浮系原生质体和粗柠檬 C. jambhiri Lush) 叶肉原生质体为融合试材 ,摸索了适合柑橘的电融合参数。研究表明 ,在 AC (交变电场) ( ) μ 125 V/ cm 、DC 直流脉冲 1 250 V/ cm、AC 作用时间 60 s 、DC 脉冲时间 50 s 、DC 脉冲个数为 3 、DC 脉冲 间隔为 0. 5 s 时融合率较高 ,双核异核体率可以达到 15 %以上。利用不同类型原生质体比重的不同,融 合后通过控制离心时间 ,可以收集到更高比例的双核异核体。融合产物经培养 ,3～4 个月再生小植株。 染色体计数结合形态学观察表明 ,再生的 150 株小植株中 78 %为四倍体 ,其余为二倍体叶肉亲本再生类 型。再生植株经过氧化物酶同工酶及 RAPD 分析 ,表明得到了体细胞杂种 ,还证明获得了 1 株叶肉亲本 同源四倍体再生类型。 关键词 　电融合,体细胞杂种 , 同工酶 ,RAPD ,柑橘 OPTIMIZATION OF EL ECTROFUSION PARAMETERS AND INTERSPECIFIC SOMATIC HYBRID REGENERATION IN CITRUS GUO WenWu 　DEN G XiuXin 　SHI YongZhong ( State Key L aboratory i n Genetic I mprovement of Crops , Huaz hong A gricult ural U niversity , Wuhan 430070) Abstract 　 This study was primarily attempted to optimize the electrofusion parameters us ing protoplasts isolated from cell suspension cultures of “Page ”tangelo ( Cit rus reticulata Blanco ×C. paradisi Macf ) and mesophyll protoplasts of rough lemon ( Cit rus jambhi ri Lush) as fusion partners. It was shown that the binuclear heterokaryons frequency reached 15 % with the following parameters : alternate current (AC) 125 V/ cm , AC time 60 s , di ( ) μ rect current DC 1 250 V/ cm , DC pulse width 50 s , DC pulse interval 0. 5 s , No.