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植物促生菌剂对甘草生长影响研究 　　摘要：利用前期从甘草等植物根际分离筛选的5株优良根际促生菌株RS1、RS5、RP1、Jm170和Jm92制成促生菌接种剂，在培养基条件下测定接种剂对甘草幼苗株高、地上生物量、地下生物量、根表面积、根体积、根平均直径和根长影响，通过主成分分析方法，筛选优良菌株。结果表明， 5种促生菌剂对甘草生长均有不同程度的促进作用，促生效果综合排序：Jm92Jm170RS1RS5RP1。与对照相比，促生菌接种剂Jm92对甘草幼苗株高、地上生物量、地下生物量、根表面积及根体积增加达极显著水平（P0.01），分别增加32.8%、51.5%、202.3%、168.1%和180.3%，其次为Jm170，其以上指标分别增加27.1%、27.4%、164.0%、177.0%和121.2%。Jm92、Jm170、RS1在研制甘草根际专用肥中具有较大潜力。 　　关键词：甘草；植物促生菌剂；促生作用；生长；根系 　　中图分类号：S 144文献标识码：A文章编号2014 　　近10年，人类对农产品的需求不断增加，为提高产量致使农业生产中大量施用化肥，中药材栽培中化肥施用量也居高不下。研究证实，各种形态的氮肥施入土壤后，都会形成硝态氮，导致土壤酸化及土壤理化性质恶化，促使土壤中一些有毒有害污染物释放和增加[1，2]。磷肥由于其特殊的加工工艺及原料中含有多种重金属、有害杂质及放射性物质[3，4]，使土壤及作物受污染。2002年6月1日《中药材生产质量管理规范（试行）》（GAP）允许限度使用化学肥料，限量使用高效、低毒、低残留农药。但由于人工栽培的中药材多为多年生药用植物，使用化学肥料势必造成有害成分和重金属在中药材中的蓄积，影响药材品质和下茬作物的种植[5]。有学者研究发现在植物根际存在能够固定空气中的氮气，分解土壤磷素，分泌植物生长激素及防治植物病害等有益微生物菌群，被称为植物根际促生菌[5]（PGPR）。利用PGPR制备的微生物肥料在培肥地力，提高化肥利用率，抑制农作物对硝态氮、重金属、农药的吸收，净化和修复土壤，降低农作物病害发生，促进农作物秸秆和城市垃圾的腐熟利用，保护环境以及提高农作物产品品质和食品安全等方面已表现出不可替代的作用[7]。为维持自然界的生态平衡及农业的可持续发展，应用微生物肥料对于中药材GAP种植具有重要意义。 　　甘草（Glycyrrhiza uralensis）为豆科多年生草本植物，地上部分粗蛋白、粗脂肪含量高，粗纤维含量低，因根和茎均能入药[9]，是中医最常用的药物之一，有“十方九草”之称。此外还在食品和轻工业等方面广为应用[10]，同时对干旱地区的防风固沙、绿化荒漠、维护生态平衡等有着重要作用[11]。由于甘草应用广泛，需求量连年上升，加之野生甘草资源的破坏，栽培甘草成为甘草药材的主要来源。 　　目前，国内外对甘草的研究多集中在化学成分的提取、分离和有效成分的开发及甘草的分类鉴定等方面[12]。此次研究以甘草为研究对象，利用前期从甘草及其他植物根际分离筛选的5株优良促生菌株进行甘草促生试验，测定其对甘草生长的影响，筛选出最优菌株，为甘草GAP 栽培及研制甘草根际专用生物肥提供理论和技术支撑。 　　1材料和方法 　　1.1供试植物 　　供试甘草品种为乌拉尔甘草。种子由宁夏农林科学院荒漠化治理研究所提供。 　　1.2菌株来源及特征 　　供试菌株为甘肃农业大学草业学院草地生物多样性实验室提供的5株优良促生菌，其特征见表1。 　　1.3培养基及营养液 　　LB培养基[13]：酵母粉5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂20 g，蒸馏水1 000 mL，pH 7.0。 　　1.4研究方法 　　1.4.1菌悬液制备 　　将LB斜面培养基上生长72 h的5种菌分别接种于100 mL LB液体培养基中，置于28 ℃，125 r/min的摇床培养3～5 d，测定D660 nm值，使D660 nm值均0.5，无菌水调节D660 nm值一致（使菌数量处于同一水平），制成单一菌悬液。 　　1.4.2种植 　　选取籽粒饱满、大小均一的甘草种子，将种子先用75%的酒精灭菌处理15 s，然后，用无菌水冲洗4～5次，再经过0.1% HgCl2灭菌处理10 min后，用无菌水冲洗干净，将种子置于灭菌后的水琼脂培养基平板中，置于25 ℃培养箱（28 ℃，16 h光照，20 000 lx，8 h黑暗）中培养，待种子芽长1～2 cm，将甘草幼苗移至装有40 mL无菌Hoagland水琼脂半固体培养基的长玻璃试管（4 cm×45 cm）中，每个试管1株幼苗，置于培养箱中培养，2 d后观察，去除移栽后死亡的幼苗。 　　1.4.3接种 　　将1.4.1中各