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正交试验法提高金银花提取物质量研究 　　摘要：目的：研究提高金银花提取物质量的最佳工艺。方法：通过正交试验法，优选最佳醇洗工艺。结果：金银花的最佳醇洗工艺为A3B3C3，即醇洗时加醇速度为200 L/h，药液温度控制在25℃，搅拌速度为60 转/分。结论：该方法稳定，重现性好，符合生产要求。 　　关键词：正交试验；金银花；绿原酸 　　 　　金银花为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb．红腺忍冬 Lonleera confusa CD．或毛花柱忍冬 Lonicera dasystyla ReM．的干燥花蕾或初开的花。具有清热解毒、疏散风热之功效，对多种细菌及病毒均有抑制作用，并且具较强的抗炎、抗变态反应的作用及提高机体抵抗力的作用。所含化学成分有绿原酸、异绿原酸、挥发油、咖啡酸、黄酮化合物、三萜皂苷、木犀草素及无机元素等，绿原酸(Chlorogenie acid)是金银花的主要药用成分。具有显著的清热解毒和抗菌消炎作用[1]。目前国内外对金银花中绿原酸类成分提取和精制工艺的研究已有许多报道，但绝大多数集中在提取溶媒、溶媒用量、提取时间、提取次数、精制方式等方面；而对水提醇沉中醇洗时加醇速度、醇洗时药液温度、搅拌速度等因素考察的报道较少。本研究就是从此下手，通过考察金银花提取物绿原酸含量，对其工艺条件进行优化研究，以期提高金银花提取物质量。 　　 　　1 仪器与试药 　　 　　1.1 仪器 　　Agilent．1200高效液相色谱仪，四元泵，自动进样器，柱温箱，DAD二极管阵列检测器，AgilentA10．02工作站。 　　1.2 试药 　　绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：110753-200212)。金银花药材(采自山东省平邑县白彦镇)；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。 　　 　　2.方法 　　 　　2.1绿原酸含量检测方法 　　方法依据：中国药典2005年版一部[2]。 　　照高效液相色谱法测定。 　　色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（15：85：1：0.3）为流动相；检测波长为324nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000。绿原酸保留时间10分钟左右，与其它峰分开，基线分离，达到理想的分离效果。对照品溶液的制备：取绿原酸对照品8.0mg，精密称定，置棕色量瓶中，加水制成每1ml中含20μg 的溶液，摇匀，即得。固形物的测定:取金银花提取物约2.0g，精密称定，置称量瓶中105℃烘干至恒重,精密称定,计算金银花提取物固形物含量。供试品溶液的制备：取金银花提取物约0.2g，精密称定，置小烧杯中加50ml水，使其充分溶解,置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀,即得。测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。 　　线性关系的考察：分别精密吸取对照品溶液2m1、4m1、6 m1、8 m1、10ml 置10 ml棕色容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件进样10μl，记录峰面积。以绿原酸的含量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=80733.41X-7998.207，r=0.9995，表明绿原酸在4～20μg /ml范围内呈现良好的线性关系。 　　精密度试验：精密吸取绿原酸对照品溶液10μl ，注入液相色谱仪，连续进样5次，依法测定，RSD=0.23％。 　　稳定性试验：分别精密吸取同一供试液10μl 于 0、1、2、4、8、16、24h进样，测定其绿原酸峰面积积分值。结果表明，供试品溶液在24h内峰面积积分值基本稳定，RSD=0.37％。 　　加样回收率试验：称取已知含量的样品6份，，每份约0.10g，精密称定。置棕色容量瓶中，分别按 (1:1)精密加入绿原酸对照品，按上述供试品溶液的制备方法制备溶液，在上述色谱条件下测定，测得平均回收率为100.98％,RSD=1.13％。 　　2.2工艺优化 　　利用正交试验优化工艺参数。由于醇洗时各项操作参数不固定，由此我们希望通过正交试验，以金银花提取物绿原酸含量为指标，考察不同A因素（搅拌速度）、B因素（醇洗时加醇速度）、C因素（醇洗时药液温度）对精制工艺的影响，找出最佳醇洗工艺参数，便于规范生产。 　　 　　3 结果与结论 　　 　　3.1试验结果分析 　　分析水平的优劣 ：依表2中数据分析A3A2A1 B3B2B1C3C2≈C1 　　分析因素的主次：从极差分析中得出BAC,由直观分析和方差分析中可以看出，只有B因素醇洗时加醇速度对金银花提取物绿原酸含量有显著性影响。确定最佳工艺条件：优选最佳工艺条件为B3A3C3，即醇洗时加醇速度为2