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淋巴瘤亚型检测中免疫组化双染技术应用策略 　　云南省曲靖市第一人民医院病理科 655000 　　【摘 要】目的：分析淋巴瘤亚型检测中免疫组化双染技术的应用策略。方法：选取反应性增生淋巴组织8例，淋巴瘤组织35例的标本作为具体的研究对象，采用免疫组化双染技术对淋巴瘤亚型进行检测，并对检测结果进行分析和对比。结果：在所选择的淋巴组织中，所选择的淋巴组织中 B淋巴细胞CD20阳性呈红色，CD79a 阳性呈棕色，T淋巴细胞CD3阳性呈棕色，CD45RO阳性呈红色。经过（CD45RO + CD79a）以及 T/B（CD3 + CD20）淋巴细胞免疫组织化双染之后，可以对淋巴瘤中的T淋巴细胞以及B淋巴细胞进行清晰的辨认，并准确判断出淋巴瘤的具体种类。讨论：免疫组化双染技术在淋巴瘤亚型检测中具有极高的检测价值，可以判断出淋巴瘤的具体种类，值得在临床检测科中推广并大力应用。 　　【关键词】淋巴瘤亚型检测；免疫组化双染技术；应用 　　淋巴瘤属于一种恶性肿瘤，它主要是来源于前体细胞以及淋巴细胞，数据调查分析显示，近年当中，该病发病率呈现上升的趋势，给人类的身心造成造成极大的痛苦和危害[1]。在临床中，如果仅在免疫组化单一标记以及HE染色的基础上来对该病进行诊断具有一定的难度，特别是在遇到肿瘤细胞中存在较多的B淋巴细胞以及T淋巴细胞的情况下。免疫组化双染技术是一种有效的检测方法，临床上经常会使用其对淋巴瘤亚型进行检测，具有极高的诊断价值。现本文主要是探讨免疫组化双染技术的具体应用策略，具体如下。 　　1.一般资料和方法 　　1.1一般资料 　　选取有反应性增生性淋巴组织8例，淋巴瘤组织患者35例的标本作为具体的研究对象。所有患者的淋巴组织标本均全部使用10%中性福尔马林来进行固定，然后进行常规石蜡包埋，切片厚度为4。一抗中包括有CD3（兔抗人）、CD20（鼠抗人）以及 CD45RO（鼠抗人）CD79a（兔抗人）。 　　1.2方法 　　根据特征采取以下步骤进行检测：1.首先要对石蜡进行切片，接着把这些切片进行脱蜡至水。2.经过高压以及高温的抗原修复之后，对其进行大约2分钟的喷剂，等待自然冷却之后，用水冲洗[2-3]。3.使用PBS（p H 7.4）进行冲洗三次，每次大约三分钟，把PBS除去后，加入大约百分之三的H2O2溶液，放在室温内进行孵育大约十分钟左右。4.分别使用蒸馏水和PBS（p H 7.4）进行冲洗三次每次大约三分钟。5.把试剂1加入后进行封闭，湿盒进行孵育大约十分钟。6.把液体除掉，免洗，在切片上加入足够量的一抗混合，进行湿盒孵育并且过夜。7.使用PBS（p H 7.4）进行冲洗三次，每次大约三分钟，把PBS除去后，把两种二抗（AP 标记山羊抗小鼠 Ig G 聚合物）和HRP 标记山羊抗兔 Ig G 聚合物）根须实际所需的比例来进行混合，在三十七摄氏度下进行湿盒孵育大约半个小时，使用PBS（p H 7.4）进行冲洗三次，每次大约三分钟[4-5]。8.在组织上加入足够量的DAB显色液，在镜下显色大约三分钟后，蒸馏水终止反应。9.使用AP-Red 　　工作液加入到每一张切片中，保证液量足以覆盖切片。10.使用无醇苏木精复染大约十五秒，接着用自来水进行冲洗，并放入到PBS 中进行返蓝。11.对组织滴加足够量的封片剂，保证封片剂可以均匀的覆盖组织，把切片进行水平放置，放置到三十七摄氏度的烤箱中大约三小时，一直到其完全变干为止。 　　2.结果 　　在所选择的淋巴组织中，B淋巴细胞CD20阳性呈红色，CD79a 阳 性 呈 棕 色，T淋巴细胞CD3阳性呈棕色，CD45RO阳性呈红色。经过（CD45RO + CD79a）以及 T/B（CD3 + CD20）淋巴细胞免疫组织化双染之后，可以对淋巴瘤中的T淋巴细胞以及B淋巴细胞进行清晰的辨认，可以准确判断出淋巴瘤的具体种类。 　　3.讨论 　　淋巴瘤属于一种恶性肿瘤，近年来发病率极高，及早诊断和治疗显得尤为关键和重要。在临床中，如果仅在免疫组化单一标记以及HE染色的基础上来对该病进行诊断具有一定的难度，特别是在遇到肿瘤细胞中存在较多的B淋巴细胞以及T淋巴细胞的情况下[6]。现今免疫组化技术是肿瘤诊断的最常用手段之一，主要包括有SP 法、LDP 法、EPOS 法、CSA PAP 法、ABC 法等等。这些方法经常被用于检测组织细胞中其中一种抗原成分。如果要想弄清楚同一细胞组织内两种抗原相互之间的关系，则需要对免疫组化进行双重标记。使用 T/B（CD3 + CD20）和 T/B（CD45RO + CD79a）淋巴细胞免疫组化双染技术能够在同一张切片上清晰的显示出两种特异性的抗原表达，让诊断医师可以很清楚的辨别出T淋巴细胞和B淋巴细胞，并判断出那些属于良性增生，哪些属于肿瘤细胞，避免误