温阳补肾方含药血清对破骨细胞凋亡率及RANK蛋白影响.docVIP

温阳补肾方含药血清对破骨细胞凋亡率及RANK蛋白影响 　　【摘 要】目的：探讨温阳补肾方含药血清对破骨细胞凋亡率及RANK蛋白的影响。方法：体外诱导破骨前体细胞系RAW264.7向破骨细胞分化，分别用温阳补肾方低、中、高剂量含药血清和生理盐水血清干预，通过流式细胞术检测各组凋亡率，Western Blot检测各组RANK蛋白水平。结果：与空白对照组 　　比较，温阳补肾方含药血清可诱导破骨细胞凋亡（P = 0.000），降低破骨细胞RANK蛋白的表达（P = 0.000）。结论：温阳补肾方含药血清可诱导破骨细胞凋亡，温阳补肾方高剂量效果最佳。 　　【关键词】 破骨细胞；凋亡；RANK蛋白；温阳补肾方；含药血清；激素性股骨头坏死 　　doi：10.3969/j.issn.2095-4174.2015.05.002 　　【ABSTRACT】Objective：To investigate the effects of serum medicated with Wenyang Bushen Formula（温阳补肾方） on osteoclast apoptosis rate and RANK protein.Methods：Differentiation in vitro was made from the osteoclast precursor cells RAW264.7 to osteoclast，which was interfered respectively with low，medium and high dose of Wenyang Bushen Formula and normal saline serum.The flow cytometry was used to detect the apoptosis rate of each group，and the Western Blot was used to detect the level of RANK protein in each group.Results：Compared with the blank control group，serum medicated with Wenyang Bushen Formula could induce apoptosis of osteoclasts（P = 0.000），and reduce the expression of osteoclast RANK protein（P = 0.000）.Conclusion：Serummedicated with Wenyang Bushen Formula can induce apoptosis of osteoclasts，high dose of which is the best. 　　【Keywords】 osteoclasts；apoptosis；RANK protein；Wenyang Bushen Formula（温阳补肾方）；serum medicated；steroid-induced avascular necrosis of the femoral head 　　前期研究表明，温阳补肾方在临床上对激素性股骨头坏死（steroid-induced avascular necrosis of the femoral head，SANFH）早期疗效显著，温阳补肾中药能通过提高SANFH兔股骨头组织中骨保护素（osteoprotegerin，OPG）、血管内皮生长因子的表达刺激成骨细胞，通过抑制RANK的表达影响破骨细胞的功能及活性[1-2]，并且温阳补肾中药某些化学成分直接作用于成骨细胞，促进其增殖[3-4]，以治疗SANFH。本实验进一步从温阳补肾方对体外培养破骨细胞凋亡率的影响方面加以??讨。 　　1 实验材料 　　1.1 实验动物 健康SPF级4周龄Wistar大鼠60只，雌雄各半，体质量（200±20） g，购自上海斯莱克实验动物有限公司，合格证号：2007000556492。 　　实验中对动物的处置符合中华人民共和国科学技术部颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》的相关要求。 　　1.2 主要试剂及仪器 胎牛血清、DMEM（Gibco公司）；TRAP染色试剂盒（GENMED公司）；细胞核因子κB受体活化因子配基（RANKL）和巨噬细胞刺激集落因子（M-CSF）（RD公司）；Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒（南京凯基公司）；电泳仪（BIO-RAD公司）；二氧化碳细胞培养箱（Thermo公司）；倒置显微镜（Leica公司）。 　　2 方 法 　　2.1 温阳补肾方含药血清的制备 温阳补肾方组成：