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甘蔗基因克隆研究进展 　　摘 要：甘蔗是我国当前主要的糖料作物，蔗糖业发展是广西的主要经济发展方向，对保障广西经济及农民生活水平具有重大的战略意义。随着基因工程技术的带动，甘蔗抗旱基因克隆对选育抗旱甘蔗品种及定向改良具有重要作用。现从甘蔗抗旱功能基因和信号转导相关基因两个方面全面进行研究总结，以期为甘蔗抗旱育种的基因克隆研究提供参考。 　　关键词：甘蔗 抗旱育种 基因克隆 研究进展 　　甘蔗（Saccharum officinarum L.）属于禾本科甘蔗属C4植物，主要生长在热带、亚热带地区，为一年生或多年生草本植物，如今是我国主要的糖料作物。蔗糖业发展是广西的主要经济发展方向，对保障广西经济及农民生活水平具有重大的战略意义。然而随着全球气候的恶化，极端天气的频繁出现，缺水干旱正严重危害着广西的甘蔗生产与发展。甘蔗属于无性繁殖的多倍体植物，具有遗传背景复杂、基因组庞大等特点，同时又缺乏优异农艺性状的育种亲本，对利用表现性状进行传统抗逆性?z传育种的研究造成诸多困难，因此如何选育高产高糖抗逆性强的甘蔗新品种成为现阶段甘蔗育种的关键转折点。 　　近年来，随着基因工程技术的发展，利用分子生物技术对甘蔗品种进行遗传性状改良已成为甘蔗育种的热门研究。选育抗旱甘蔗品种对甘蔗产业的可持续发展甚为重要，而通过基因改良提高甘蔗抗旱性是目前比较热门的研究方向。了解与分析近年来对甘蔗抗旱基因克隆的相关研究现状，有助于为下一步研究把握方向，为进一步挖掘出更多重要抗旱基因用于甘蔗品种改良打下坚实基础。 　　1 甘蔗渗透调节相关基因的研究 　　甘蔗是一种对水分和热量要求比较高的植物，在甘蔗的生理代谢、营养吸收和物质转化等过程中均少不了水分的参与，因此水分是维持甘蔗正常生长发育的重要物质。当甘蔗受到干旱胁迫时，苗期蔗苗的萌芽、中期蔗株的分蘖、伸长以及后期甘蔗糖分的积累等不同生长发育过程均会受到限制，从而使甘蔗体内发生一系列的生理生化反应，如渗透调节物质变化、活性氧增加、光合作用受抑制等，是影响甘蔗产量和品质最主要的非生物胁迫因素。大量研究发现干旱胁迫时甘蔗体内会积累大量的代谢物质，并通过自身的调节功能维持细胞内外的物质平衡和渗透压平衡。这些渗透调节物质分为2类：一类是游离小分子有机物质，主要包括脯氨酸、甜菜碱、可溶性糖、氨基酸等；另一类是外界进入植物体内的无机离子，主要有K+、CL-、Ca2+、Mg2+、Na+等。 　　脯氨酸是一种小分子的渗透物质，在正常生理pH范围内不带静电荷，对植物无毒害作用。在细胞含水量很低时脯氨酸仍能提供足够的自由水，从而维持细胞的正常活动，因此脯氨酸被认为是与抗旱性密切相关的植物渗透调节物质。在干旱胁迫时为了提高植物的抗旱性，植物细胞内会积累大量游离脯氨酸，从而增加植物对水分胁迫和渗透胁迫的抗性[1]。至今已从水稻、拟南芥、黑麦、大豆、番茄等植物中成功克隆出了多个脯氨酸合成酶或与之相关的基因，研究证明。1-吡咯琳-5-羧酸合成酶（P5CS）与脯氨酸脱氢酶（ProDH）都是脯氨酸合成的主要酶类。Molinari等[2]将脯氨酸合成酶基因（P5CS）导入甘蔗体内中，结果表明转基因甘蔗在干旱情况下诱导脯氨酸大量积累，在干旱12 d后转基因植株的生物量明显提高。黄城梅[3]采用同源克隆与RT-PCR方法从甘蔗中成功克隆到Sc-P5CS基因，建立反义植物表达载体后转入烟草，进行研究发现转入Sc-P5CS基因的烟草植物矮小、叶片变黄，猜测这与抑制了脯氨酸的合成有很大的关系。 　　海藻糖能够有效的保护植物体内细胞膜和蛋白质的结构，因此甘蔗在受到干旱胁迫时海藻糖可以有效防止细胞失水，从而使甘蔗具有更强的抗旱、抗寒能力。Li等[4]在水稻中克隆并转基因海藻糖-6-磷酸合成酶基因OsTPS1，结果发现不仅可以使一些与干旱胁迫相关的基因上调表达，而且在诱导表达的转基因植株中，海藻糖和脯氨酸的浓度明显高于普通植株。Zhang[5]等将海藻糖合成酶基因转入甘蔗，通过对转基因甘蔗体内一系列生理指标的测量，转基因植株能够合成和积累海藻糖并明显提高了甘蔗的抗旱性。 　　2 甘蔗抗氧化防御类相关基因的研究 　　当植物受到干旱胁迫时活性氧产生的速率会随着胁迫的加大而递增，从而导致细胞内的活性氧代谢失去平衡，而过剩的活性氧将在细胞内诱发自由基连锁反应，然后产生H2O2、O2-、OH- 等更多的自由基和活性氧，当细胞内大量积累活性氧类物质时就会对细胞造成一定的伤害，主要表现为[6-8]：①加快细胞膜脂过氧化，从而损伤甚至瓦解维持植物细胞区域化的膜系统；②活性氧攻击核酸碱基，破坏核酸结构，使变异产生并积累；③活性氧与色氨酸残基或者酶蛋白的巯基发生反应使酶失活；④活性氧对DNA复制过程的伤害，导致蛋白质的合成受到破坏。超氧化物歧化酶（SOD）、过氧