甘草黄酮对大强度耐力运动大鼠肾脏组织细胞凋亡及BaxBcl2蛋白表达影响.docVIP

甘草黄酮对大强度耐力运动大鼠肾脏组织细胞凋亡及BaxBcl2蛋白表达影响 　　摘要：目的：探讨甘草黄酮对大强度耐力运动大鼠肾脏组织细胞凋亡及Bax(促凋亡基因，B apoptosis cell、Bcl-2(B细胞淋巴瘤基因-2，B cell lymphoma gene-2)蛋白表达的影响。方法选取SD雄性健康大鼠24只，随机分为安静组、太强度运动组和运动加药组；采用跑台训练6周后取材，应用免疫组织化学法测检测各组大鼠肾脏组织细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果：与安静对照组相比，大强度耐力运动组和运动加药组大鼠细胞凋亡指数AI均有不同程度增加；大强度运动组Bax、Bcl－2蛋白表达(MOD)均呈非常显著差异性(P0.01)，运动加药组Bax蛋白表达(MOD)均呈非常显著差异性(P0.01)；运动加药组Bd-2蛋白表达(MOD)与大强度运动组具有非常显著差异性(P0.01)；大强度运动组和运动加药组Bax／Bcl-2比值分布呈不同程度的显著差异性(P0.05，P0.01)。结论：甘草黄酮能够提高大强度运动大鼠抗氧化能力，降低肾脏组织自由基的产生，抑制肾脏组织细胞的凋亡。 　　关键词：甘草黄酮；大强度耐力训练；肾脏；细胞凋亡；Bax；Bcl-2 　　中图分类号：G804.7 　　文献标识码：A 　　文章编号：1007-3612(2011)02-0061-04 　　 　　随着竞技体育的迅猛发展，运动训练强度和量以及竞赛周期的增多，探索和利用运动营养补剂，减轻或消除运动疲劳、增强运动技能一直是运动训练学和营养学领域研究的热点之一。甘草黄酮是从甘草提取物中得到的一类生物活性较强的成分，现代中药学研究表明，甘草黄酮具有抗肿瘤，抗氧化，抗病原微生物作用、解毒、抗炎、抗病毒、增强免疫机能等作用。众多研究表明，急性、大强度运动及过度训练将引起肾脏缺血再灌注，诱导肾脏细胞凋亡增加，也可能是造成运动性疲劳和运动性蛋白尿发生的原因之一。目前关于中药补剂对大强度耐力运动肾脏组织的影响报道尚无，本实验通过建立大强度耐力运动大鼠模型和补充甘草黄酮的实验手段，采用透射电镜和生化检测等手段观察和分析了甘草黄酮对大鼠肾脏组织细胞凋亡及Bax、Bal-2蛋白表达的影响，为进一步研究运动营养补剂对机体肾脏的保护机制提供理论依据。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　 　　1.1实验动物及其分组Sprague－Dawley(SD)雄性健康大鼠36只，体重180～220g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。国家标准啮齿类动物干燥饲料喂养，自由饮食，动物室湿度23％±5℃，相对湿度40％～70％，分笼饲养备用。 　　1.2实验模型建立实验动物适应性饲养7d后，以以15m／min、5min／d运动量对动物进行为期3d的筛选，淘汰个别不适应跑台训练者。选取其中大鼠24只随机分为安静对照组、大强度运动对照组和运动加药组，每组8只。甘草黄酮购自西安天一生物制品公司，棕黄色粉末，其中总黄酮糖苷含量为75％。加药组采用甘草黄酮溶于蒸馏水溶液中，灌胃加药，用量为300mg／kg／d，其它组采用灌服同等量的蒸馏水作为对照。每天训练前以15m／min的速度做适应运动5min后正式训练，训练模型基于Bedford模型结合实际略加调整，共为期6周(表1)。 　　1.3动物的处死、取材及样品制备方法 　　1.3.1动物处死与取材第6周训练最后一天，用乙醚麻醉后，断头处死，取肾脏组织置于预冷的生理盐水中洗净血污后，迅速切取2mm×2mm×2mm的组织块立即置于预先备好的2.5％戊二醛固定液中4℃固定，2.4h后进行常规石蜡包埋，每个蜡块每隔20μm连续切片5张，每张厚5μm，用于免疫组织化学和TUNEL检测。剩余蜡块组织投入液氮中保存待用。 　　组织匀浆的制备：称取适量组织(0.2-1g)按w(g)组织块重量／V(mL)匀浆介质为1／9的比例加取预冷的匀浆介质(0.8％的NaCL溶液)于烧杯中，用眼科小剪刀尽快剪碎组织块(以上操作均在冰水裕中进行)。手工制备匀浆后，3000转／min低温离心15min，分离提取上清液4℃冰箱冷藏。 　　1.3.2HE染色组织切片常规脱蜡水化后进行HE染色，胞核染成蓝色，胞质染成红色，光镜下观察肾细胞的整体结构。染色操作过程如下：常规脱蜡水化，双蒸水浸洗5min－苏木素染色10～15min，双蒸水浸洗5min×3次－盐酸酒精分色10～20min，双蒸水浸洗5min－伊红染色3min－梯度酒精脱水、二甲苯透明、树胶封片、镜检。 　　 　　1.3.3相关指标的检测肾脏组织细胞凋亡采用TUNEL检测法，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，严格按照说明书操作；所有切片均采用OLYMPUS显微照相图像采集系统拍片，以S