滇重楼预处理对脓毒症大鼠肠道功能保护及小肠HMGB1表达影响.docVIP

滇重楼预处理对脓毒症大鼠肠道功能保护及小肠HMGB1表达影响 　　摘要：目的构建脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导脓毒症（sepsis）大鼠早期肠损伤模型，给予不同浓度滇重楼（Rhizoma Paridis of yunnan）灌胃预处理，探讨滇重楼对脓毒症大鼠的肠道功能保护及小肠高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein B1，HMGB1）表达的影响。方法清洁级成年SD大鼠雌性80只，随机分为5组，16只/组，对照组、模型组、低剂量组（20mg/kg.po）、中等剂量组（40mg/kg.po）、高剂量组（80mg/kg.po）。给予滇重楼预处理后，构建脓毒症大鼠模型（LPS 1mg/kg.iv），于24h取材，检测血中白细胞数（WBC）、谷丙转氨酶（ALT）、肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）、肌酐（Cre）、乳酸（Lac）的含量，行小肠病理检查并组织学评分，采用ELISA法检测血浆中二胺氧化酶（DAO）和D乳酸（D-Lac）的含量，分别采用WesternBlot和Q-PCR检测小肠中HMGB1的蛋白及mRNA表达水平。结果模型组大鼠与对照组比较全血中ALT、CK-MB、Cre、Lac含量升高，WBC含量下降，有统计学意义（PⅢ级百分比升高，有统计学意义（P0.05）。模型组血浆中DAO和D-Lac含量高于对照组，而滇重楼治疗组低于模型组，差异有统计学意义（P0.05）；模型组大鼠小肠HMGB1的蛋白及mRNA表达水平高于对照组，而滇重楼治疗组低于模型组（P0.05）。结论滇重楼预处理可能通过抑制HMGB1表达参与抗炎反应，从而改善小肠黏膜屏障通透性，发挥肠道保护功能，同时提高脓毒症大鼠的生存率，优化预后。 　　关键词：脓毒症；滇重楼；肠道功能保护；高迁移率族蛋白B1 　　中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）11-0071-04脓毒症（sepsis）是重症医学科危重患者常见死因之一，患病率约为人口3‰，病死率高达20.3%～29.9%[1]，是机体对感染的反应失调而导致危及生命的器官功能障碍[2]，也是严重创伤、休克、感染、外科手术等常见并发症。目前，脓毒症的发病机制尚不完全明确，而肠道细菌及内毒素移位导致的肠黏膜屏障功能障碍是其主要机制之一，也是脓毒症发生的始动环节，可诱发失控性全身炎症反应综合征（systematic inflammatory response syndrome，SIRS）致多器官功能障碍综合征（Multiple organ dysfunction syndrome，MODS），常表现为肠道功能紊乱发生最早及恢复最迟。高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein B1，HMGB1）是一种高度保守的非组DNA结合蛋白，可诱导RAGE、TLR2/4、NF-κB等炎症因子释放导致多器官靶细胞损伤，作为一种晚期炎症因子在脓毒症的发生发展中起重要作用[3-5]。 　　据报道，滇重楼多种成分具有抗炎作用，临床可用于器官保护、抗病原微生物、抗蛇虫毒及治疗免疫系统和妇产科疾病[6]。笔者前期研究，利用脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）15mg/kg腹腔注构建大鼠肠黏膜功能障碍模型，滇重楼连续灌胃提示其肠黏膜抗炎保护作用。但结合临床实践经验，脓毒症炎症因子瀑布样级联释放常使疾病迅速向MODS难逆转性转变，如何在SIRS早期通过抑制炎症因子释放成为干预疾病转归的重点。本课题拟通过LPS 1mg/kg股静脉注射构建脓毒症大鼠早期肠损伤模型，探讨滇重楼预处理对脓毒症大鼠的肠道功能保护及小肠HMGB1表达的影响。 　　1材料与方法 　　1.1材料清洁级健康成年SD大鼠雌性80只，体重（200±10）g，由解放军昆明总医院科研实验中心提供（实验动物质量合格证号：SYXK（滇）2016-2017）。滇重楼由昆明医科大学第四附属医院药剂科提供。脂多糖购于美国Sigma公司；血浆二胺氧化酶（DAO）和D乳酸（D-Lac）ELISA试剂盒购于武汉华美公司；HMGB1一抗、二抗购于abmart公司；Trizol Reagent 试剂盒购于Lifetech公司；RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒购于Fermentas公司。 　　1.2方法 　　1.2.1实?动物分组实验采用成组设计，清洁级健康SD大鼠雌性80只，随机分为5组，对照组、模型组、低剂量组、中等剂量组、高剂量组，每组16只。将滇重楼颗粒用生理盐水制成混悬液灌胃预处理，剂量按照成人剂量的5倍、10倍、20倍，分别对应低剂量组（20 mg/kg）、中等剂量组（40 mg