生脉注射液中人参皂苷Rg1,Rb1在心肌缺血大鼠体内药动学药效学结合研究.docVIP

生脉注射液中人参皂苷Rg1,Rb1在心肌缺血大鼠体内药动学药效学结合研究 　　[摘要] 该文研究生脉注射液中主要成分人参皂苷Rg1和Rb1在心肌缺血大鼠体内的药动学过程及其诱导体内NO释放效应的药动学-药效学（PK-PD）结合模型。以大鼠皮下注射异丙肾上腺素（ISO）制备心肌缺血模型。模型大鼠静脉给予生脉注射液（10.8 mL·kg-1），于给药后不同时间点采集大鼠血清，测定血清中人参皂苷Rg1和Rb1的浓度，绘制药-时曲线，拟合药动学模型，计算药动学参数；同时测定血清中NO代谢产物NO2-和NO3-水平，绘制时-效曲线，采用Sheiner等提出的效应室理论建立PK-PD结合模型，计算药效学参数。研究结果显示人参皂苷Rg1和Rb1在大鼠体内的药动学过程均符合二房室开放模型，人参皂苷Rg1在体内表现出快消除的特点，人参皂苷Rb1表现出慢消除的特点。生脉注射液诱导大鼠体内NO释放效应与人参皂苷Rg1和Rb1的血药浓度不直接相关，效应滞后于血药浓度，效应与人参皂苷Rg1和Rb1的效应室浓度成良好的相关性，符合Sigmoid-Emax模型。该研究成功建立了生脉注射液在心肌缺血大鼠体内的PK-PD结合模型，可较有效地用于预测生脉注射液的血药浓度和效应。 　　[关键词] 生脉注射液；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；一氧化氮；药动学-药效学结合 　　药动学-药效学结合（pharmacokinetics-pharmacodynamics， PK-PD）研究是将药物动力学和药效动力学结合起来，同时阐述机体对药物的作用和药物对机体的作用[1-2]。开展中药PK-PD结合研究，不仅能够为新药创制、质量评价及临床给药方案制订等提供科学数据，还有助于阐明中药的药效物质基础及其作用机制，因而受到中医药研究人员的日益重视，被认为是中药现代化的重要研究领域[3-5]。 　　生脉注射液由红参、麦冬和五味子3味中药制成，被广泛用于心肌梗塞、心源性休克和感染性休克等的临床治疗[6]。目前，已有部分学者开展了该复方制剂的药代动力学研究[7-9]，但关于该复方制剂的PK-PD结合研究尚未见报道。因此，本实验以心肌缺血大鼠为实验动物模型，以生脉注射液主要药效物质成分人参皂苷Rg1和Rb1为药代标志物，以NO氧化代谢产物NO2-和NO3-含量在给药后对给药前比值的变化为效应指标，采用Sheiner等[10-11]提出的基于效应室理论的药动学-药效学（PK-PD）结合模型，综合分析心肌缺血大鼠给予生脉注射液后，人参皂苷Rg1和Rb1的血药浓度、时间和诱导NO释放效应三者之间的关系，计算有关的药动学和药效学参数。通过PK-PD结合模型的建立，旨在评价人参皂苷Rg1，Rb1和生脉注射液诱导体内NO释放效应的相关性，探讨生脉注射液抗心肌缺血可能的作用机制，为临床合理用药提供实验依据。 　　1材料 　　1.1药品与试剂 对照品人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1，Rg1）、人参皂苷Rb1（ginsenoside Rb1； Rb1）购于上海融禾医药科技发展有限公司。生脉注射液（批号1106081，A公司）。异丙肾上腺素（isoproterenol， ISO）购于Sigma公司。内标物地高辛（digoxin）购于中国食品药品检定研究院。甲醇和乙腈为色谱纯（Merck公司），乙酸为色谱纯（Tedia公司），水为Milli-Q超纯水。其余试剂均为分析纯。 　　1.2动物 清洁级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重（203±6）g，购于上海斯莱克实验动物有限公司。合格证号 SCXK（沪）2007-2005。饲养环境：室温为（22±2） ℃，湿度为（50±10）%。所有大鼠于12 h光照和12 h黑暗环境下适应性饲养数天，自由饮食饮水。给药之前禁食12 h，全程不禁水。 　　1.3分析仪器 Agilent 1200液相色谱仪（德国Agilent公司），API 4000三重四级杆质谱联用仪（美国Applied Biosystems公司）；Waters 2695 HPLC液相色谱仪，配Waters 2475型荧光检测器。SPD121P型离心浓缩仪（美国Thermo公司）；Mini spin离心机（德国Eppendorf公司）；涡旋震荡器（德国IKA公司）；Mettler Toledo XS 105DU型分析天平（瑞士Mettler公司）。 　　2方法 　　2.1心肌缺血模型的制备 按50 mg·kg-1剂量大鼠皮下注射ISO生理盐水，每天给药1次，连续给药2 d制备急性心肌缺血大鼠模型。 　　2.2给药和血样采集 取模型大鼠6只，于第2次给药ISO后30 min眼眶取血0.3 mL作为空白血样。随后按10.8 mL·kg-1（相当于人参皂苷Rg1和人