用蛋白质指纹技术预测局部晚期胰腺癌伽玛刀治疗疗效研究报告.docVIP

用蛋白质指纹技术预测局部晚期胰腺癌伽玛刀治疗疗效研究报告 　　【摘要】 目的：使用蛋白质指纹技术（SELDI）预测伽玛刀治疗局部晚期胰腺癌治疗效果的临床应用价值。方法：选择2010年2月-2014年10月本院35例行伽玛刀胰腺癌患者，于治疗前抽血保存于-80 ℃低温冰箱，伽玛刀治疗后2个月，按WHO实体间质谱技术（SELDE-TOF-MS），通过分析血清特异性蛋白质质谱图，寻找差异蛋白指纹。结果：有效组与无效组中共检测出56个蛋白质峰，其中丰度（M/Z）为3337、9234、11 650的蛋白质组指纹两组比较，差异有统计学意义（P0.05），其中无效组上调的峰M/Z为3337、11 650，下调的峰M/Z为9234。结论：使用SELDI可以预测伽玛刀治疗局部胰腺癌的临床疗效，为临床治疗提供指导。 　　【关键词】 蛋白质指纹技术； 胰腺癌； 伽玛刀 　　胰腺癌是我国常见的消化道恶性肿瘤，其发病率近年来在我国逐年上升。随着胰腺癌的影像学诊断技术及生物学检测技术不断提高，胰腺癌的诊断有了一定的进展，但该疾病的早期诊断问题依然存在且尚未得到圆满解决[1]，大部分诊断时已为晚期，失去手术治疗机会，预后极差，75%患者常在诊断后年内死亡[2]。5年生存率为5%以下，明显低于其他恶性肿瘤[3-4]。现阶段，全世界针对晚期胰腺癌的治疗无有效治疗手段，我国也结合自身国情，不断探索新的、有效的治疗途径。近年来，伴随着计算机、电子技术、分子生物学的不断发展，立体定向放射治疗技术应用而生，γ刀即γ射线立体定向放射外科（治疗）在我国得到长足发展。因γ刀较常规放疗明显的优势是对瘤体部位可给予较高的照射剂量，但对周围正常组织影响小，在治疗局部晚期胰腺癌取得很好的短期治疗效果，且大多数患者均能耐受。体定向放射治疗逐渐被认为是治疗不能手术切除胰腺癌的主要手段之一[5-6]。但在临床中也发现，部分患者在治疗后效果差，而往往在肿瘤明显增大后才发现进展，最佳的治疗价值已经失去。针对这一问题，笔者利用蛋白质-飞行时间质谱（Surface-enhance laser desorption ionization， SELDI）技术对胰腺癌伽玛刀治疗后疗效进行前瞻性研究，结果汇报如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 选择2010年2月-2014??10月在本科住院治疗的胰腺癌患者35例，其中男21例，女14例；年龄36～80岁，中位年龄54岁；入院前都进行肿瘤标志物（CA19-9、CEA等）检测、超声及CT等检查。其中15例病理诊断为腺癌，3例病理诊断为黏液腺癌；有5例侵犯至胆管，有4例侵犯至临近大血管者，有4例肿瘤直接侵及至十二指肠，有6例侵犯至胰腺周围组织；肿瘤平均直径5 cm者 　　10例，平均直径5 cm者25例。入组标准：（1）化验血细胞分析大致正常；（2）经组织病理学或细胞学诊断为胰腺癌，同时排除发生远处转移者，根据美国癌症联合委员会（AJCC）肿瘤分期标准，诊断为局部晚期胰腺癌者；（3）治疗前行超声、CT断层扫描、磁共振或PET-CT等影像学检查，经临床诊断为胰腺癌；（4）患者拒绝行手术治疗或因内科疾病本能行手术治疗或患者经外科会诊，不适合行手术治疗；（5）心、脑、肺、肾等器等明显功能在障碍；（6）患者治疗前KPS评分为60～100分；（7）能 　　够耐受固定体位30 min以上；（8）预计生存期在 　　3个月以上。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标本采集 所有伽玛刀治疗患者在治疗前，晨起采空腹静脉血约3 mL（非抗凝管），静置，离心处理后，分离出血清，放置于-80 ℃低温冰箱。 　　1.2.2 主要仪器、软件及试剂 立体定向伽玛射线全身放射治疗系统（SGS-Ⅰ型，深圳海博公司）。能量吸收分子EMA，HFPF缓冲盐（Sigma公司），MATLAB 7.0.1软件，Biomarker Wizar、CM10型蛋白质芯片及其分析软件ProteinChip 3.2.0（Ciphergen公司），PBS-Ⅱc表面增强飞行时间质谱仪（SELDI-TOF-MS），CHAPS缓冲盐（Sigma公司）。PBSⅡc型蛋白质芯片飞行时间质谱仪（Ciphergen公司），LDZ5-2型低速自动平衡离心机（北京医用离心机厂），MDF-382型-80 ℃冰箱（SANYO公司），振荡器（MS1 Minishaker），PB20型pH测量仪（SARTORIUS公司），ER-182A型电子天平（AD公司），2、10、20、100、200、1000 μL微量加样枪（Gilson公司），Tips P20，P200，P1000（AXYGEN公司），50 mL离心管（CORNING公司），0.5 mL，1.5 mL微形离心管（AXYGEN公司），Biomarke