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激光共聚焦扫描显微镜光学设计
激光共聚焦扫描显微镜光学设计
摘要: 为获得较高分辨率的细胞图像,设计了激光共聚焦光学系统。通过较复杂结构物镜实现了照明光路系统和发射光路系统的设计。用Zemax对照明光路和发射光路进行了设计,仿真过程中照明光路的聚焦弥散斑直径小于1 μm,照明针孔处的聚焦弥散斑直径小于20 μm,发射光路的聚焦弥散斑直径小于20 μm,同时照明光路和发射光路的MTF曲线接近衍射极限,达到较理想的情况。
关键词: 激光共聚焦; 光学设计; 照明光路系统; 发射光路系统; Zemax
中图分类号: TH 703 文献标志码: A doi: 10.3969/j.issn.1005-5630.2016.03.006
文章编号: 1005-5630(2016)03-0221-05
Abstract: In order to obtain the high-resolution cell image,we designed a laser scanning confocal optical system.The light system and emission system were realized based on the objective of complex structure.The Zemax was used for the system optical design.In the simulation the focal spot size of light system was less than 1μm,and the focal spot size was less than 20 μm at the light pinhole position.The focal spot size was less than 20 μm at the emission pinhole position.At the same time light system and emission system of the MTF curve was close to the diffraction limit to reach the ideal situation.
Keywords: laser confocal scanning; optical design; lighting system; emission system; Zemax
引 言
激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)是以激光作为光源[1],激光束经照明针孔形成点光源对焦平面上标本进行扫描,标本上的聚焦点在与其共轭的探测针孔的位置成像[2],这样所得到的共焦图像是样本的光学横断截面的图像。由此可知,激光共聚焦扫描显微镜的成像原理与普通的光学显微镜明显不同,它以抑制焦点外物点信息的光信号来实现高分辨率,再采用扫描技术来弥补视场小的缺点[3]。理想情况下,实现点对点的成像。与普通光学显微镜相比,它可以获得更高的横向分辨率,并且具有较高的纵向分辨率。利用这样的特性,实现了对样品三维结构重建和测量分析的工作,为研究生物组织等物体结构提供了有效的工具[4]。
本文根据LCSM工作原理设计了共聚焦扫描光学系统,并用Zemax对所设计光学系统进行仿真和优化。
1 激光共聚焦工作原理
在共焦显微成像系统中,使用共焦探测针孔不但使得整个光学系统拥有了高分辨轴向响应特性,同时具有抗杂散光和增大对比度的优点。激光共聚焦扫描显微成像系统是利用物镜使光束聚焦形成很小的光点,通过光点与样品之间的相对运动,实现对样品逐点扫描成像。激光共聚焦扫描显微成像采用焦点共轭的技术,使照明针孔、探测针孔、被照射的样品都处在彼此的共轭位置。这样只有在焦平面上的点被光源照射所激发出的荧光能够通过探测针孔而被光电探测器所接收,焦面以外的光线或聚焦在针孔前或聚焦在针孔后,会很大程度地被抑制掉,因此共焦探测针孔的作用相当于一个针孔滤波器,可以极大地提高激光共焦显微成像系统的纵向分辨率[5]。
2 光学系统设计过程
激光共聚焦光学系统由照明光路系统和发射光路系统组成。如图1所示,激光器发出的激光束经过准直扩束透镜组(镜组1、2),变成一束直径较大的平行光束,二向色镜4使光束偏转90°,经过物镜3会聚在其焦点上。样品中的荧光物质在激光激发下发射沿各个方向的荧光,一部分荧光经过物镜、二向色镜、高通滤波片5、聚焦透镜(镜组6)会聚在聚焦透镜的焦点处,再通过焦点处的针孔7,由探测器8接收。
2.1 照明光路设计
2.1.1准直扩束系统
激光准直扩束系统由图1中的镜组1和透镜2组成,其从左到右各面的参数如表1,通过改变光束束腰直径,使激光的准直
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