猪源沙门氏菌携带I类整合子向人源细菌体外转移研究.docVIP

猪源沙门氏菌携带I类整合子向人源细菌体外转移研究 　　摘 要：为考察猪源沙门氏菌携带的I类整合子向人源细菌在体外接合试验中的转移频率，在体外接合试验中应用PCR方法检测细菌间I类整合子的转移。结果表明：人源沙门氏菌I类整合子转移效率在1.6×10-3 ～2.5×10-4 cfu?mL-1（供体菌）之间，人源大肠杆菌I类整合子转移效率在1.5×10-5 ～8.3×10-6 cfu?mL-1 （供体菌）之间，猪源沙门氏菌I类整合子未转移给人源金黄色葡萄球菌。因此，猪源沙门氏菌I类整合子携带耐药基因盒在体外可向人源革兰氏阴性菌发生转移，且转移频率较高。 　　关键词：沙门氏菌；体外接合试验； 整合子；转移 　　中图分类号：R446.5 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2015.10.004 　　Abstract： To investigate the transfer frequency of class I integrons from swine Salmonella to human bacteria on the conjugation test in vitro， the transfertation of class I integrons between the strains was determined with PCR method. Results showed that the transfertation rate of class I integrons from swine Salmonella to human Escherichia coli were in 1.6×10-3 ～2.5×10-4 cfu?mL-1 （donor strain）， and to human Salmonella were 1.5×10-5 ～8.3×10-6 cfu?mL-1 （donor strain）. Class I integrons were no found in human in human Staphylococcus aureus. So， class I integrons of swine Salmonellae could transfer to gram-negative bacteria of human origin in vitro and the transfer frequency was quite high. 　　Key words：Salmonella； integron； transfer； conjugation test in vitro 　　沙门氏菌（Salmonella）是全球公认的主要动物源细菌传染病，危害人和动物健康的重要致病菌，严重威胁养殖业和食品安全[1]。整合子是介导细菌耐药性产生的主要机制之一[2]，同时整合子可定位于质粒上，也可以作为转座子的一部分参与转移，使耐药基因在细菌种间和种内发生转移[3]。整合子携带耐药基因体外转移多集中在临床菌株的研究中[4]，但对动物源细菌的报道较少，且整合子携带耐药基因盒在细菌间水平转移，加快了临床耐致病菌获得耐药性。本研究是将5株猪源沙门氏菌I类整合子阳性菌株与人源性不携带I类整合子的沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌各1株进行耐药基因的体外转移试验，考察I类整合子携带耐药基因能否在人源、动物源细菌间传播，为细菌耐药性的传播监测提供理论依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 试验菌株 供体菌：猪源沙门氏菌5株，含有I类整合子（贵州大学药理实验室保存）。 　　受体菌：人源大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌各1株（由贵阳市疾病预防控制中心惠赠），且不携带I类整合子及耐药基因盒。 　　1.1.2 培养基和试剂 LB肉汤、缓冲蛋白胨水（BPW）、GN增菌液、木糖赖氨酸脱氧胆酸钠琼脂培养基（XLD）、伊红美兰琼脂培养基（EMB）、贝尔德-帕克氏琼脂培养基（BP）均购自杭州博微生物技术有限公司；四环素和链霉素购自上海博微科技有限公司。Ex Taq酶试剂盒购自TaKaRa公司。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 体外接合试验 [5-7] 供、受体菌分别于LB肉汤中37 ℃过夜；调整菌液为2个麦氏浓度，各吸0.1 mL加入0.8 mL LB肉汤，37 ℃孵育4 h；菌液3 800 r?min-1离心2 min，弃上清液，1 mL生理盐水将沉淀混匀；吸取0.1 mL涂布于MHA平板，37 ℃过夜；经102～103倍稀释后吸取0.1 mL菌液涂布于含双抗菌药物（0.02 mg?mL-1四环素+0.05 mg?mL-1链霉素）的EMB、XL