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生物技术在药用植物次生代谢产物方面应用进展 　　摘要：综述了近年来生物技术在我国药用植物次生代谢产物方面的应用进展，包括植物组织、细胞培养产生次生代谢产物，发状根培养生产次生代谢产物，植物细胞生物反应器在药用植物次生代谢物生产中的应用概况，并提出了该领域存在的问题和发展方向。 　　关键词：生物技术；药用植物；次生代谢产物；应用进展 　　植物次生代谢物（plant secondary metaboliteS）是指植物中一大类并非植物生长发育所必需的小分子有机化合物，其产生和分布通常有种属、器官组织和生长发育期的特异性。植物次生代谢物种类繁多，化学结构迥异。现在，已知大约有10000种次生代谢物，包括酚类、黄酮类、香豆素、木脂素、生物碱、糖苷、萜类、甾类、皂苷、多炔类、有机酸等，可分为性化合物、萜烯类化合物、含氮有机物3大类。植物次生代谢是植物在长期进化中对生态环境适应的结果，对植物在其生态系统中的生存起作用，如抗虫、抗病、异株相克、吸引昆虫授粉、与共生微生物相互作用等。 　　近年来，植物细胞大量培养以提取有用次生代谢产物的研究，并没有像人们所预计的那样广泛地进入工业化生产，主要是发现细胞培养物的成本太高；越来越多的研究者已把工作重点转移到以细胞生物学和分子生物学为基础的次生代谢物的产量提高及成本的降低，主要表现在以下几个方面： 　　1植物组织、细胞培养生产次生代谢产物 　　次生代谢物是药用植物重要有效成分，但由于野生资源日益减少和栽培品种品质退化，给临床使用和质量控制带来许多困扰。利用生物技术生产有效成分，能缓解药用植物资源压力。对于那些生长条件要求严格、生长缓慢、产量小、采集困难、价值贵重的植物药，用这种方法更具有重要意义。利用植物组织、细胞培养生产次生代谢产物能克服以上缺点。天然抗癌药物紫杉醇在红豆杉植物中含量很低，即使现在公认含量最高的短叶红豆杉树皮中也仅有0.069%。周忠强等（2004）通过采用固定化植物细胞培养技术可以克服细胞大量培养中的许多困难，以小规模的培养细胞大量生产胞外目的产物。因为包埋于惰性基质的固定化提供了适于细胞分化的条件，结果提高了次生物质的产量，如李承森等（1 998）报道熏衣草细胞的固定化培养，辽宁紫草细胞的固定化培养等都取得了很好的效果。次生化合物的合成需要相当多的代谢酶（包括同工酶）基因参与，这些基因的遗传变异直接影响药材的功效。目前已有不少调控次生化合物代谢的关键酶基因被研究。例如，苯丙烷类代谢酶系是目前了解最清楚的植物次生代谢物合成途径，其中许多酶基因已被克隆。利用黄酮、水杨酸等的生物合成都由此途径合成，这个途径的关键酶是本丙氨酸解氨酶（PAL）、肉桂酸-4-经化酶（CA4H）和4-香豆酸CoA连接酶（4CL）。 　　在植物组织培养研究中，发现培养细胞中含有各种特殊的代谢产物、药用成分和各种香精等。其中有些是微生物；有些是人工所不能合成的物质；有些是整体植物中含量甚微或整株植物十分缺乏，而培养细胞中的含量却很高，如柠檬叶、鸡眼藤的培养细胞中蒽醌含量比完整植株中高10倍。因此，以培养细胞生产这些有用成分已受到生物学、医学及商业界人士的极大关注。目前用于以次生代谢产物生产为目的的组织培养和细胞培养的药用植物已有许多种。从细胞培养物中分离得到的有用物质有：酶类（d一淀粉酶、淀粉酶、蛋白水解酶、过氧化氢酶、酸性磷酸化酶、B一糖苷酶、I―AA氧化酶、细胞色素氧化酶等）；生物碱（莨菪生物碱、利血平、吲哚生物碱、麦角碱等）；甾体（地奥甙元、山革皂甙元、育努皂甙元等）；萜类（角鲨烯、羊毛甾醇、环阿屯醇、人参三醇、人参二醇、油烷酸、人参甙等）；色素等。1 964年，中国科学院上海植物生理研究所首先成功地进行了人参的组织培养，随后我国和其他国家的一些学者将人参的组织培养过渡到工业化生产。目前我国学者已经建立了长春花、人参、丹参、三七、三尖杉、忍冬、红花、黄连、西洋参等几十种药用植物的液体培养系统，并实现了人参的I OL体积的大规模培养。胡之璧等（1 998）对其培养细胞进行化学成分和药理活性比较分析，表明与种植人参无明显差异，并已作为美容保健品投放市场，这是我国药用植物生物技术产品商品化的第一个范例。 　　通过筛选高产细胞系、改进培养条件和技术以及设计适合植物细胞培养的发酵罐，人们已对包括紫草、长春花、毛地黄、黄连等在内的多种药用植物细胞进行大规模生产试验，有的已成商品投入市场。为了加速植物细胞培养技术商业化生产进程，各国科学家们一方面不断改进培养技术，如控制培养的气相环境，加入刺激剂，加入大孔树脂吸附剂等；一方面发展新的培养方法，如高密度培养、连续培养和固定化培养等，以期得到一种适合于植物细胞工业生产的培养方法。随着研究的不断发展，植物细胞大规模培养成为一种成熟的工业化生产方式已经为期不远