白及组织培养建立与快速繁殖研究.docVIP

白及组织培养建立与快速繁殖研究 　　摘要：以白及（Bletilla Reichb.f.）种子为外植体，通过不同的培养基进行愈伤组织诱导培养与继代生根培养，研究白及种子快速繁殖的最优培养基配方。结果表明，愈伤组织诱导培养最佳培养基组合为液体培养基1/2 MS+1.5 mg/L 6-BA+6.0 mg/L IAA+pH 8.2；在植物生长调节剂6-BA与NAA愈伤组织液体诱导培养中以1/2 MS+4 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+pH 5.8最佳；MS+pH 5.8培养基对生根较好，1/2 MS+pH 5.8对丛生芽的增殖较好；试验为白及建立植株繁殖体系提供了科学依据。 　　关键词：白及（Bletilla Reichb.f.）； 种子；组织培养；快速繁殖；培养基配方 　　中?D分类号：S567.23+9.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）24-4807-04 　　白及属（Bletilla Reichb.f.）为兰科（Orchidaceae）多年生草本植物，地下部分具肥厚的肉质根状茎或假鳞茎；作为中药材有3个种，分别是华白及[B.sinensis（Rolfe）Schltr.]、黄花白及（B.ochracea Schltr.）和小白及[B. formosana（Hayata）Schltr.][1，2]。白及假鳞茎含白及胶质（白及甘露糖）黏液（约55%），还含淀粉挥发油等成分[3]。可用于痈疽疮肿、跌打损伤、刀箭创伤及烫火伤治疗，能生肌止痛，具美容作用，治面部痤疮、除疥?`、止肺部出血等[4]。其不仅具有医药用途，同时也有极高的观赏价值。白及在每年的9-10月蒴果由淡黄到褐色而成熟，然后破裂，散出种子；但白及的种子在自然环境中几乎不萌发，可能与种子发育不完整有关。目前白及的栽培主要采用分株繁殖方式，繁殖系数低，生长周期较长，不宜进行大规模的商业化生产。随着植物组织培养技术的发展，白及的试管繁殖已成为可能。已经有选用白及种子进行无菌播种、初代培养、继代培养、壮苗培养、生根培养、移栽培养的报道[5]，还进行了白及共生菌的分离、初步鉴定和伴生菌研究，这为建立完善的白及快繁体系奠定了技术基础，对扩大白及栽培规模、满足市场需求以及保护野生资源[6]都具有重要意义。有学者已在白及组织培养方面进行了实践，如曾宋君等[7]做了白及无菌播种及试管苗茎尖组织培养；田英翠等[8]进行了白及组织培养快繁技术研究；石云平等[9]以白及侧芽为外植体，进行白及组织培养快速繁殖技术研究，??人工栽培提供了大量种苗；余朝秀等[10]认为炼苗基质以60%腐叶土+30%珍珠岩+10%素红土为佳，炼苗温度23～27 ℃，空气相对湿度在80%～90%有利于提高炼苗成活率。试验采用未成熟的白及蒴果进行无菌播种培养和试管苗的组织培养，着重研究并筛选白及组织培养的最佳培养基配方及培养程序，旨在建立无性繁殖体系，探索脱毒白及生产快速繁殖技术，这不但能在短期内获得大量的无病毒种苗满足市场需求，而且通过放养有利于白及野生资源的保护。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　白及种子以及植物生长调节剂NAA、6-BA、IAA由恩施州农业科学院实验室提供；选取白及种子作为外植体，流水冲洗2 h后用滤纸吸干水分，在超净工作台上用75%酒精浸泡30 s左右，然后用0.1%的升汞振荡消毒3 min，去离子水清洗5次，再接种到培养基中。 　　1.2 方法 　　1.2.1 外植体诱导愈伤组织正交试验 以白及种子为试验材料，选用MS培养基为基础培养基，MS培养基母液的配制及保存参考文献[11]的方法。以植物生长调节剂、琼脂、pH和MS稀释倍数4因子、3水平设计L9（34）正交试验，具体见表1。每个处理10次重复， 培养条件为温度25 ℃、光照度1 500～2 500 1x、每天光照24 h。通过以上处理诱导出愈伤组织后，进行下一步继代培养及丛生芽增殖培养。 　　1.2.2 继代与生根培养 愈伤组织继代与生根培养采用4组培养基，各组培养基配方如下：Ⅰ组固体培养基、液体培养基为MS+pH 5.8；Ⅱ组固体培养基为MS+0.5 mg/L NAA+pH 5.8；Ⅲ组固体培养基为1/2 MS+0.5 mg/L NAA+pH 5.8；Ⅳ组固体培养基、液体培养基为1/2 MS+pH 5.8。每组10次重复，比较各组对白及愈伤组织继代与生根培养的影响。 　　1.2.3 增殖培养 对继代与生根培养出来的外植体通过诱导培养基分别增殖培养，使已分化的外植体再次脱分化，诱导出更多的丛生芽。以1/2 MS （pH 5.8）为基础培养基，添加不同组合的6-BA、NAA，各处理组合见表2，每处理10个重复。比较不同植物生长调节剂对丛生芽增殖的影响。 　　2 结果与分