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秘鲁番茄高效再生体系研究 　　摘要：以秘鲁番茄的叶片和茎段为外植体，研究不同外植体种类、激素配比对秘鲁番茄愈伤组织诱导、分化和不定芽生根的影响，以期建立秘鲁番茄组织培养高效再生体系。结果表明：秘鲁番茄的叶片较茎段更适宜愈伤组织诱导与分化，以叶片为外植体时，最佳愈伤组织诱导培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA，愈伤组织诱导率高达1000%；愈伤组织分化的最佳培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA，不定芽的分化率高达92.4%。以茎段为外植体时，最佳诱导愈伤培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.1 mg/L IAA，愈伤组织诱导率高达95.8%；愈伤组织分化的最佳培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA，不定芽的分化率高达86.5%。不定芽最适宜的生根培养基为MS+1.0 mg/L NAA，生根率达100.0%。采用草炭土+珍珠岩（体积比1 ∶1）的混合基质作为移栽基质，移栽成活率可达90%以上。 　　关键词：秘鲁番茄；愈伤组织；植株再生；驯化 　　中图分类号：S641.204+.3 文献标志码： A文章编号：1002-1302（2017）07-0037-03 　　番茄（Lycopersion esculentum Mill.）是一种重要的蔬菜作物，其营养丰富，在我国蔬菜周年供应中占有非常重要的位置。随着育种技术的不断发展，番茄品种不断丰富，番茄产量不断提高，但随着设施番茄种植面积的不断增加，番茄病害的发生也逐步加重，特别是番茄病毒病经常呈暴发趋势[1-3]，对番茄生产造成了严重危害，并且病害?l生时往往以复合侵染的形式危害。现有番茄品种的抗性已不能满足现实的生产需求。同时，番茄属于严格的自花授粉作物[4]，经过人类长期的驯化和选育，其栽培种的遗传背景已经变得越来越狭窄，仅依靠现有栽培种已很难满足育种要求。 　　与栽培番茄资源匮乏相反，番茄属野生种番茄及番茄近缘野生种类番茄（Solanum lycopersicoides）中却拥有丰富的优良遗传性状[5]，能抗多种病虫害，有较高的抗旱性、耐盐性和可溶性固形物含量等。秘鲁番茄（L. peruvianum）是栽培番茄的一种近缘野生种，对番茄的多种病害均表现出较强的抗性或免疫性[6]，在改良番茄抗性方面具有重要的利用价值，但秘鲁番茄与栽培番茄的有性不亲和障碍问题迄今尚未得到很好解决[7]。通过原生质体融合等远缘体细胞杂交技术，可以将野生番茄属植物或者近缘种的遗传物质转入到番茄栽培种中，创造出具有多抗、高品质的优良性状种质资源，而建立秘鲁番茄高效再生体系是利用体细胞杂交的基础。本试验以秘鲁番茄的叶片和茎段作为外植体，通过添加不同浓度和配比的激素，建立其高效再生体系，为充分利用秘鲁番茄的优异性状奠定基础。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　秘鲁番茄植株由东北农业大学李景富教授番茄育种课题组提供。田间取秘鲁番茄的腋芽，进行表面消毒处理后接种于MS基本培养基获得无菌苗。 　　1.2试验方法 　　1.2.1外植体的消毒处理田间取刚吐出的秘鲁番茄腋芽，先用洗洁精清洗腋芽，除去表面尘土，自来水冲洗20～30 min，用滤纸吸干水分。移入超净工作台后，先用75%乙醇浸泡15 s，再用0.1% HgCl2浸泡8 min，无菌水冲洗5～6次，无菌滤纸吸干水分，接种于MS基本培养基。 　　1.2.2愈伤组织诱导将获得的秘鲁番茄无菌苗的叶片切成1 cm×1 cm的小块，将其茎段切成1.0～1.5 cm左右的小段，将这2种外植体分别接种到添加不同浓度ZT（1.0、2.0、3.0 mg/L）和IAA（0.05、0.1、0.2、0.3 mg/L）的培养基上进行诱导培养。 　　1.2.3愈伤组织的分化将诱导出的愈伤组织转接到添加不同浓度ZT（1.0、2.0、3.0 mg/L）和IAA（0.05、0.1、0.2、0.3 mg/L）的培养基上诱导不定芽的产生。 　　1.2.4激素对秘鲁番茄生根培养的影响将高1～2 cm的不定芽分切下来，分别转入附加不同浓度IAA（0.5、1.0、1.5 mg/L）和NAA（0.5、1.0、1.5 mg/L）的MS生根壮苗培养基中，以MS基本培养基为对照，20 d后观察统计生根率。 　　1.2.5幼苗移栽将高5 cm以上、根系发达的健壮幼苗炼苗移栽，每天逐渐打开瓶盖，3 d后完全打开瓶盖，置于通风明亮的常温房间里保持3 d，每天早、中、晚各喷水1次，洗净附着在根系的培养基，移植在草炭土+珍珠岩（体积比1 ∶1）栽培基质上，淋水、罩上透明塑料薄膜保持湿度，7 d后打开保湿罩，20 d后统计成活率。 　　2结果与分析 　　2.1秘鲁番茄愈伤组织的诱导 　　将叶片和茎段2种外植体