神昌注射液对脑栓塞大鼠IL6 IL8 mRNA表达影响.docVIP

神昌注射液对脑栓塞大鼠IL6 IL8 mRNA表达影响 　　摘要：目的：探讨神昌注射液对缺血再灌注脑损伤大鼠脑组织IL-6、IL-8 mRNA表达的影响。方法：MCAO法造成大鼠脑缺血再灌注损伤模型，静脉给药7次，采用荧光定量RT-PCR法测定大鼠脑组织IL-6、IL-8mRNA表达。结果：神昌注射液明显降低缺血再灌注脑损伤大鼠脑组织IL-6、IL-8mRNA表达。结论：神昌注射液抗脑缺血损伤的作用机制之一可能是通过减少IL-6和IL-8的表达、减轻其引发的一系列损伤。 　　关键词：神昌注射液；石菖蒲；冰片；IL-6；IL-8；mRNA 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)04-0691-02 　　 　　神昌注射液由石菖蒲和冰片组成，有开窍醒脑、减轻脑损害的功效，主治急性期和恢复早期中风病痰湿蒙神证。笔者曾报道石菖蒲对中枢神经系统（CNS）兴奋性有双向调节作用[1]，能改善缺血再灌注脑损伤大鼠的脑电图和脑水肿[2]；冰片也有醒脑和镇静抗惊厥、延长小鼠耐缺氧存活时间的作用[3]。本文进一步观察神昌注射液对缺血再灌注脑损伤大鼠脑组织IL-6、IL-8mRNA表达的影响。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1动物 　　SPF级雄性SD大鼠，体重250～350g，动物合格证号: 2005A010。动物购自广东省医学实验动物中心。 　　 　　1.2药物与剂量 　　受试药物：神昌注射液，批由本实验中心提供。临床用量30mL/天。阳性对照药：醒脑静注射液（无锡山禾药业股份有限公司，批号060301）具有开窍醒脑的作用，临床用于治疗中风病神昏谵语等，且剂型相同，故作为阳性对照药。临床用量20mL/天，大鼠的等效剂量1.9mL/kg。给药剂量为等效剂量的2.5倍，即每日给药剂量4.75mL/kg。阴性对照药：基质。 　　 　　1.3分组与给药 　　大鼠随机分为8组，每组10只。神昌注射液高、中、低剂量组、阳性对照组、模型对照组、假手术对照组、口服对照组及正常对照组。阴茎背静脉注射，每日两次，共给药7次。给药剂量：高、中、低剂量组分别为等效剂量的6.25、2.5、1倍。即每日给药剂量17.5、7.0、2.8mL/kg。 　　 　　1.4仪器与试剂 　　荧光定量PCR仪（AMI 7700型，美国）；低温高速离心机（Sigma 3K30型，德国）；6010紫外／可见分光光度计（惠普上海分析仪器公司）；AE200型电子分析天平（瑞士Mettler）；T25B型组织分散机（马来西亚JKIKA WORKS）。Trizoll核酸提取液、反转录试剂盒、荧光定量PCR扩增试剂盒（Invitrogen公司）；IL-6mRNA上下游引物、荧光探针（中山达晖基因公司）。 　　 　　1.5实验方法 　　1.5.1大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）试验[4]大鼠预给药5次，第5次给药后，造MCAO模型。缺血120min后再灌注24h，取脑皮质和海马检测IL-6、IL-8mRNA的表达。 　　1.5.2RT-PCR检测IL-6 IL-8mRNA脑组织总RNA提取、逆转录反应、PCR扩增反应（条件：首先93℃ 2min；然后93℃ 1min，55℃ 1min，共40个循环）。按试剂盒提供的操作程序进行。 　　 　　1.6统计处理方法 　　采用SPSS统计软件对数据进行单因素方差分析。 　　 　　2结果 　　 　　神昌注射液对缺血再灌注脑损伤大鼠脑组织IL-6、IL-8mRNA表达的影响：神昌注射液能降低脑缺血大鼠脑皮质和海马IL-6、IL-8mRNA表达，并呈明显的量效关系，见表1。 　　 　　 　　3讨论 　　 　　神昌注射液具有开窍醒脑、宁神护脑的功效，用于急性期和恢复期中风、脑损害，主治急性脑中风引起的偏瘫、昏迷、失语、狂躁不安等症。其中石菖蒲开窍豁痰、醒神益智，对脑中风模型大鼠有减轻脑水肿、改善脑电图、提高耐缺氧能力的作用[2]，并能保护脑细胞，显著抑制脑皮质和海马神经细胞凋亡，抑制bax基因表达，而促进bcl-2基因表达[5]；冰片“芳香走窜”，“引药上行”，可开放血脑屏障，促进某些水溶性大分子物质和药物透过血脑屏障[6]。本实验结果表明：神昌注射液能降低脑缺血大鼠脑皮质和海马IL-6、IL-8mRNA表达，减轻脑损害，这为其临床治疗脑缺血性中风，减轻脑组织损害提供了药效学依据。 　　IL-6分子量为21~26KD，由184个氨基酸组成，可被多种细胞诱导，T淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞以及脑内的胶质细胞都可以分泌IL-6。在机体的免疫应答、炎症反应、神经/内分泌功能、造血调控和急性时相反应等防御中发挥重要作用。近年来证实IL