穿心莲水提取物联合抗菌药对含fosA3大肠杆菌作用.docVIP

穿心莲水提取物联合抗菌药对含fosA3大肠杆菌作用 　　摘要：研究穿心莲水提取物与抗菌药联合诱导细菌传代的体外抑菌活性。对临床分离的细菌进行鉴定，确定细菌所含耐药基因种类，用牛津杯法测定穿心莲水提取物的抑菌活性和平板涂布法测定穿心莲水提取物的杀菌活性，采用二倍微量稀释法体外检测穿心莲水提取物与抗菌药的最小抑菌浓度（MIC），穿心莲水提取物与抗菌药联合诱导含fosA3型大肠杆菌细菌传代。研究结果，分离到fosA3型耐药基因大肠杆菌；穿心莲水提取物的MIC为1 g/mL，穿心莲水提取物与抗菌药联用后，可明显地增强头孢菌素类、青霉素类、氟喹诺酮类、喹啉类、磺胺类、氨基糖苷类、酰胺醇类和磷霉素对耐药菌的抑制作用。结果表明，穿心莲水提取物对含fosA3大肠杆菌有一定的抑菌活性和杀菌活性，与部分抗菌药联合应用后，抗菌药体外抗菌活性显著增强。 　　关键词：穿心莲水提取物；含fosA3大肠杆菌；联合诱导；最小抑菌浓度（MIC） 　　中图分类号： S853.74文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）06-0348-03 　　收稿日期：2015-05-05 　　基金项目：国家自然科学基金（编号；国家科技支撑计划（编号：2012BAD25B04）；广西科技攻关（编号：0992014-2）；广西自然科学基金（编号：2012GXNSFBA053052、2013GXNSFAA019070）；广西南宁市科技攻关（编号；广西大学兽医一级学科博士启动基金（编号：2012GXNSFBA053052）；广西高校优势特色专业建设项目。 　　作者简介：吴永继（1991―），女，河南驻马店人，硕士，主要从事中兽药研究。 E-mail：wyjalisa@163.com。 　　通信作者：司红彬，博士，副教授，主要从事细菌耐药性研究。E-mail：zhuli_2009@163.com。穿心莲（Andrographis paniculata）是中国民间常用中药，是一种具有广泛应用开发前景的植物资源，具有解热[1]、抗炎[2]、抗病毒感染[3]、免疫调节作用[4]、治疗心血管疾病[5]、抗癌[6-8]、治疗消化系统疾病[9]及抗生育[10]等作用，临床应用于肠道感染、呼吸道感染、皮肤疾病等[11]以及急性菌痢、胃肠炎、感冒发热、高血压等心血管疾病的治疗。研究结果表明，穿心莲具有很好的体外抗菌活性，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌均有明显的抑菌作用[12]。磷霉素是一种广谱抗菌药，对常见革兰氏阳性菌和阴性菌均具有抗菌活性，与其他抗菌药无交叉耐药性，并与多种抗菌药联合应用时呈协同作用。近年研究发现，应用磷霉素治疗各类尿路感染仍然高度有效，且细菌耐药率低。近年来，随着产ESBLs（Extended Spectrum β-Lactamases）细菌的流行，质粒介导的耐磷霉素基因fosA3（fosfomycin resistance gene）[13]的发现，且fosA3为产ESBLs肠杆菌科细菌中常见的Fos基因类型，fosA3基因常与ESBLs基因共同转移，这可能会造成不同耐药的共同传播。这将对畜牧养殖业和公共卫生安全产生巨大的威胁。目前，抗菌药的研发速度缓慢，远远赶不上细菌耐药性产生的速度，这些耐药基因可以在菌株间以质粒介导的形式传播，甚至能够通过直接与人体接触传播或者间接地通过食物链向人体进行传递，这将给人类安全及养殖业带来很大的危害。因此，找到一种可以延缓耐药性产生或逆转病原菌耐药性的药物显得尤为重要。目前，对含fosA3型耐药基因细菌方面的联合用药，尤其是中药成分与抗菌药联合作用鲜见研究报道。本试验旨在探究穿心莲水提取物联合抗菌药对含耐fosA3型大肠杆菌的体外抑菌作用。为减少细菌对临床常用抗菌药的耐药性和对穿心莲的进一步开发利用提供一定的理论基础。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　穿心莲购自广西万丰药业有限公司，批牛肉膏蛋白胨、牛津杯、MH肉汤、LB肉汤、MH 琼脂、普通琼脂、麦康凯琼脂、牛肉膏蛋白胨、伊红美蓝琼脂、营养肉汤、生化试剂均购自杭州天和微生物试剂有限公司；Taq酶、dNTP、10×PCR buffer、引物、琼脂糖均购自上海生工生物工程有限公司；抗菌药：头孢曲松钠、阿莫西林、诺氟沙星、黏杆菌素、痢菌净、磺胺间甲氧嘧啶、阿米卡星、头孢他啶、头孢噻呋钠、氟苯尼考、磷霉素，均在有效期范围内。 　　1.2菌株分离鉴定 　　病原菌的分离培养从猪场采集患病猪的肠道病料，将其浸入灭菌生理盐水，充分洗脱，将其悬浮液接种于普通平板，37 ℃ 培养18～24 h，挑取可疑菌落接种到麦康凯琼脂和伊红美蓝琼脂平板进行培养。依据标准[14-15 ]对所分