糖尿病心肌PTEN蛋白表达变化及其在糖尿病心肌IPo中影响.docVIP

糖尿病心肌PTEN蛋白表达变化及其在糖尿病心肌IPo中影响 　　[摘要]目的：分析糖尿病心肌PTEN蛋白表达变化及其在糖尿病心肌IPo中的作用。方法：选取健康成年SD大鼠，腹腔注射1%链脲佐菌素（STZ）（60mg/kg）诱导糖尿病模型。对照组给予等量的生理盐水。将糖尿病大鼠和非糖尿病大鼠随机分为3组：假手术组（Sham）；缺血/再灌注组（IR）；缺血后处理?M（IP0）。部分亚组糖尿病大鼠在缺血前1h用trFEN抑制剂BPV（HOpic）干预后再进行缺血/再灌注损伤实验。免疫组化方法分析心肌PTEN、PI-3K、p-Akt的表达；TYC法检测心肌梗死面积；TUNEL法检测心肌细胞凋亡。比较非糖尿病与糖尿病组及BPV干预前后糖尿病各组相应指标的变化。结果：IPo明显降低了非糖尿病鼠心肌细胞中PTEN的表达，增加了H-3K和p-Akt的表达，但未能减少PTEN在糖尿病鼠心肌中的表达，相应的Pl-3K和p-Akt的表达也无明显改变。与N+S组相比，N+IR及N+IPo组的凋亡指数增高（P0.06）。BPV干预各组的心肌PI-3K及P-Akt的表达高于未干预各组（P0.05）。与未经BPV干预的各组相比，被干预各组的心肌凋亡细胞减少。心肌梗死面积比较BPV干预的各组心肌梗死减少。结论：高血糖导致心肌PTEN高表达使PI-3K/Akt信号通路失活，是导致IPo对心肌IRI保护作用丧失的一个重要原因。 　　[关键词]糖尿病；缺血再灌注损伤；缺血后处理；PTEN；BPV 　　有研究发现PTEN（Phosohatase and tensin honologdeleted on chromosometen，PTEN）是PI-3K/Akt信号通路的负性调控因子。它起初被发现是一种肿瘤抑制基因。后来越来越多的研究发现它在调节细胞增殖、生长和凋亡中也起到重要作用。有研究显示，与非糖尿病大鼠相比，糖尿病大鼠体内PTEN的表达明显增多，并会随着病程的延长增加其表达的程度。增加PTEN的活性会使胰岛素的敏感性下降，并且会增加2型糖尿病的风险。Mensah等人实验证明，通过阿托伐他汀进行IPC，可通过激活PT-3K/Akt信号通路，对非糖尿病大鼠心肌IRI产生保护作用，但对糖尿病大鼠心肌IRI的疗效显著降低，其主要原因是由于PTEN的拮抗作用。Crackower等人通过对mN半量表达的PTEN+/-小鼠离体心脏的研究表明，在P1EN+/-的小鼠体内，Akt的活性明显增加，经4周期的预处理PTEN+/-组的心肌梗死面积明显小于6周期预处理的PTEN+/+对照组。因此可以看出P1EN在糖尿病心肌IRI中也扮演着重要的角色。然而关于PTEN在缺血后处理（Ischemic postconditioning，IPo）的作用机制中发挥着怎样的作用，以及IPo对糖尿病心肌IRI保护作用的消失是否与糖尿病心肌中PTEN高表达有关，现在还不十分清楚。因此，本研究拟探讨糖尿病心肌PTEN蛋白表达变化及其在糖尿病心肌IPo中的作用。对比IPo对糖尿病和非糖尿病心肌PTEN/PI-3K/Akt信号通路的影响情况，及其对心肌IRI的改善情况；观察抑制PTEN的表达是否能改善糖尿病心肌的损伤程度；证明糖尿病心肌PTEN的高表达是导致心肌IRI耐受力降低和IPo保护作用消失的重要原因。 　　1.材料与方法 　　1.1材料 实验动物：220～280g成年SD大鼠130只，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。主要试剂及仪器：SureStep血糖仪、血糖试纸（美国强生公司）；Bene View T5型监护仪（西安巨田医疗设备有限公司）；DW-2000型动物呼吸机（上海嘉鹏科技有限公司）；高精度电子天平（精度0.0001g，上海越平科学仪器有限公司）；SHHW21Gr600恒温水浴箱（北京长安科学仪器厂）；Olympus显微镜（日本Olympus公司）；Olympus BXS0显微摄影系统（日本Olympus公司）；EPSON-V30扫描仪（日本Epson公司）；ImageProPlus6.0计算机图像分析软件（美国Media Cyberneties）；链脲佐菌素（Streptozoein，STZ），美国Sigma公司；戊巴比妥钠（Pentobarbital），美国Sigma公司；伊文氏蓝（Evans blue），美国Sigma公司；三苯基氯化四氮唑（TTC），美国Sigma公司；Bpv（HOpic），瑞士Alexis公司；PTEN单克隆抗体，北京博奥森生物技术有限公司；P13K（P85cL亚型）单克隆抗体，北京博奥森生物技术有限公司；P-Akt（ser-473）单克隆抗体，北京博奥森生物技术有限公司；免疫组化试剂盒，武汉博士德生物制品有限公司；TUNEL试剂盒，南京建成生物工程