耐力训练对肌球蛋白重链影响及MyoDMyogenin调控作用.docVIP

耐力训练对肌球蛋白重链影响及MyoDMyogenin调控作用 　　摘要：为了解耐力训练对肌球蛋白重链(MHC)组成及生肌调节因子MyoD和Myogenin表达的影响，探讨MyoD和Myogenin表达与MHC转换的关系，选用雄性SD大鼠20只，随机分成安静对照组(10只)和耐力训练组(10只)。耐力训练组进行跑台练习：跑台坡度10°，跑速20m／min，每天1次，每次1h，每周训练6d，28d后取浅层胫前肌。SDS-PAG正方法测定MHCⅠ、Ⅱa、Ⅱx、Ⅱb蛋白组成；RT―PCR测定MHCs及MyoD、MyogeninmRNA表达。结果：耐力训练没有改变MHCs蛋白表达，耐力训练后Ⅱx―MHCmRNA表达显著减少(P0．05)；耐力训练使MyoD、MyogeninmRNA均显著下降。结果说明耐力训练使快型MHC基因表达减少；快型MHCⅡx减少可能与MyoD表达下降有关，MyoD和Myogenin可能参与MHC表达的调节。 　　关键词：肌球蛋白重链；生肌调节因子；耐力训练 　　中图分类号：G804.7 　　文献标识码：A 　　文章编辑：1006―7116(2007)02-0048-05 　　肌球蛋白是骨骼肌细胞中表达最多的蛋白，占总蛋白的25%。天然的肌球蛋白由6条多肽链组成，这6条多肽链包括两条重链和两对不同的轻链。肌球蛋白重链(Myosin heavychain，MHC)分子质量约为200 000 u两对不同的轻链分别为碱性轻链和调节轻链。肌球蛋白因其具有ATP酶活性，所以又称肌球蛋白Ca2+-ATP酶。 　　快肌和慢肌的最大缩短速度与肌球蛋白高低的Ca2+-ATP酶活性相关[1]。这主要由于快慢肌所表达的MHC类型不同。快型肌纤维含有快型MHC异型体，表达为高的肌球蛋白Ca2+-ATP酶活性，同样，慢型肌纤维含有慢型MHC异型体，表达为低的肌球蛋白Ca2+-ATP酶活性。研究肌肉肌球蛋白重链组成对于了解肌肉收缩特性有重要意义。 　　研究表明，肌肉MHC组成是可以发生改变的，这些因素包括胚胎发育、神经交叉支配、激素、运动、非活动性因素等等。但调控MHC表达的机制一直不很清楚。 　　最近有报道显示，生肌调节因子(Myogenic regulatoryfactors，MRFs)参与胚胎期肌发生过程，并在成年骨骼肌中选择性表达。因此，研究MRFs对于了解MHC转变机制具有积极的意义。 　　生肌调节因子属于碱性螺旋一环一螺旋(bHLH)转录调节因子，可以结合DNA，调节基因的转录，由MyoD、myogenin、myf5、MRG4个蛋白组成。MRFs可与E盒(E蛋白)形成异二聚体，这个异二聚体反过来结合到E盒特异的DNA序列上，转录调节DNA的表达。这个E盒序列已被检测为CANNTG(N为任意碱基)，在几个肌肉表型蛋白的调控区，如快肌球蛋白的轻链、MHC Ⅰ和MHCⅡh[2]、肌钙蛋白Ⅰ和desmin上都有E盒的存在。 　　 　　1材料与方法 　　1．1 实验动物 　　雄性SD鼠20只，体重(232±10)g，由河北医科大学实验动物中心提供。动物随机分成两组，安静对照组10只(C)、耐力训练组10只(T)，均分笼饲养，自由饮水进食，室内温度(22±3)℃。 　　1．2运动方式 　　耐力训练组首先熟悉跑台，每天进行递增的跑台练习(跑速10～20m／min，持续时间10～60min／d)，5d后正式开始训练。跑台坡度10°，跑速22 m／min，持续时间60 min／d，运动强度约70％～75％VO2max。跑台训练共计28 d。 　　1．3主要试剂和仪器 　　(1)骨骼肌肌球蛋白重链(MHC)蛋白组成：(SDS―PAGE方法，参照Talmadge[3]) 仪器：LKB 2301 Macrodrive 1,Power Supply；LKB 2050Midget Electrophoresis Unit． 　　试剂：SDS为BIOMOL公司产品，优级纯；Tris为AUGUS公司产品，超级纯；TEMED、β巯基乙醇为SERVA公司产品，研究级。 　　(2)骨骼肌MHC Ⅰ、Ⅱa、Ⅱx／d、Ⅱb4个亚型及MyoD、myogenin的mRNA基因表达：(RT-PCR方法) 　　试剂：逆转录酶(M-MLV)、Oligo(dt)、dNTP为Promega公司产品，Taq酶为Takara公司产品，PCR引物由北京奥科生物技术有限责任公司设计、合成。 　　1．4实验步骤 　　(1)肌肉组织提取：训练28 d的鼠用戊巴比妥钠实施麻醉(50 mg/kg)，剥离出白色胫前肌浅层(TA)迅速投于液氮中保存待用。 　　(2)肌球蛋白提取：1)快速称取浅层胫前肌100 mg，置于1．9 mL匀浆液中(匀浆液成分：30