艾灸“大肠俞”对大鼠背根神经节p2x7受体介导内脏痛敏的作用研究-生理学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 研究背景与目的： 肠功能紊乱性疾病（如肠易激综合征）和炎性反应性肠病常出现内脏敏感 性增高，而内脏痛敏是引发内脏痛的最主要病理机制。功能性肠病肠壁与炎性 反应性肠病相似也存在炎性反应，肠壁慢性炎性剌激产生内脏伤害性反应，伤 害性信号引发内脏痛。三磷酸腺苷（ATP）及其作用的 P2X7 受体在痛觉伤害性 信息传递中具有重要作用。外周感受器感受伤害性刺激后形成伤害性冲动是通 过背根神经节（DRG）初级感觉神经传入。艾灸可能具有抗炎免疫调节作用。 热敏灸是施灸热敏腧穴治疗时通过产生透热、扩热、传热、局部不热远部热等 现象的一种悬灸治疗方法。临床研究显示热敏悬灸可较好治疗肠易激综合征， 但其作用机制尚不清楚。本研究以新生乳鼠结直肠扩张（colorectal distension, CRD）制备肠易激综合征内脏痛敏模型，悬灸大鼠热敏腧穴“大肠俞”40 min 模拟热敏灸，观察艾灸镇痛效应是否与肠壁慢性炎症剌激后背根神经节 P2X7 受 体表达变化有关。 方法： （1）以新生乳鼠结直肠扩张制备肠易激综合征内脏痛敏模型，悬灸大鼠热 敏腧穴“大肠俞”40 min 模拟热敏灸治疗；（2）检测对照组，模型组，艾灸非穴位 组和艾灸穴位组大鼠腹壁撤退反射评分(abdominal withdrawal reflex, AWR)评分 和内脏痛敏阈值（3）免疫荧光双标法观察卫星胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋 白（GFAP）与 P2X7 受体的共表达情况。(4)RT-PCR 观察各组背根神经节 P2X7 受体 mRNA 表达的变化。(5)免疫组织化学和 Western Blot 方法检测各组大鼠背 根神经节 P2X7 受体蛋白表达变化。 结果： 1、新生乳鼠直结肠球囊扩张刺激 8 周建模后检测结果表明：模型组 CRD 痛 敏阈值较对照组痛敏阈值明显降低，模型组在 20、40、60、80 mmHg 各级 CRD 的 AWR 评分较对照组明显增高（p0.01）。结果表明新生乳鼠 CRD 连续刺激可 形成内脏痛敏模型。 II 2、穴位艾灸组大鼠痛阈值较模型组大鼠增加(p0.01)，非穴位艾灸组大鼠痛 阈值与模型组比较无差异(p0.05)。穴位艾灸组在 20、40、60、80 mmHg 各级 CRD 的 AWR 评分均较模型组明显降低 (p0.01)，非穴位艾灸组与模型组比较无 差异（p0.05）。 3、免疫组织化学检测显示：模型组 DRG 中 P2X7 受体免疫反应性水平较对 照组明显增加(p0.01)，艾灸“大肠俞”穴位组较模型组 P2X7 受体表达水平显著下 降(p0.01)，艾灸非穴位组与模型组之间无差异 (p0.05）。 4、逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测结果显示：模型组 DRG 中 P2X7 mRNA 表达水平较对照组明显增加(p0.01)，艾灸“大肠俞”穴位组较模型组 P2X7 mRNA 表 达 水 平 显 著 下 降 (p0.01) ， 艾 灸 非 穴 位 组 与 模 型 组 之 间 无 差 异 (p0.05）。 5、免疫荧光双标检测显示：背根神经节细胞 P2X7 受体和胶质纤维酸性蛋白 （GFAP）共表达，模型组 P2X7 受体和 GFAP 的表达较对照组明显增加，而艾 灸“大肠俞”穴位组与模型组相比其 P2X7 受体和 GFAP 的表达显著降低，艾灸非 穴位组与模型组之间无差异。 6、蛋白印迹结果显示：模型组背根神经节 P2X7 受体蛋白的表达水平较对照 组明显增加，而穴位艾灸“大肠俞”组与模型组相比其 P2X7 受体蛋白的表达水平 显著降低(p0.01)，非穴位艾灸组与模型组之间无差异(p0.05）。 结论： 热敏灸大肠俞穴通过抑制内脏痛导致的背根神经节 P2X7 受体 mRNA 和蛋白 表达水平的上调，降低背根神经节 GFAP 的异常表达，阻抑伤害性信息传递，产 生降低内脏痛模型大鼠 AWR 评分、提高其痛阈的效应，从而对内脏痛敏引发的 肠功能紊乱性疾病和炎性反应性肠病产生治疗作用。 关键词：艾灸；背根神经节；嘌呤 2X7 受体；卫星胶质细胞；内脏痛敏； 结直肠扩张 III Abst Abstract ABSTRACT Backround and Objective: Intestinal disorders (such as irritable bowel syndrome) and inflammatory bowel disease often appear visceral hypersensitivity. Visceral hyperalgesia is the most important pathological mechanisms of visceral pain. Th