胞核m-csf对人宫颈癌hela细胞药物抗性的影响-肿瘤学专业论文.docxVIP

 PAGE 29 胞核 M-CSF 对人宫颈癌 HeLa 细胞药物抗性的影响 硕 士 研 究 生： 陈文琦 指 导 教 师： 姜 浩 教授 唐圣松 教授 中 文 摘 要 目的 探讨胞核 M-CSF 对人宫颈癌 HeLa 细胞药物抗性的影响。 方法 分别以浓度为 0.2μg/mL、2.0μg/mL、20μg/mL 的顺铂或紫杉醇孵育 HeLa 细 胞、HeLa-M 细胞（M-CSF 稳定转染并在核定位表达的 HeLa 细胞）、HeLa-C 细胞（空载体稳定转染的 HeLa 细胞）48 小时后，MTT 法检测细胞相对活性、 台盼兰拒染法测细胞存活率。分别以浓度为 0.2μg/mL、2.0μg/mL、20μg/mL 的顺 铂或紫杉醇孵育 HeLa-M 细胞、HeLa 细胞、HeLa-C 细胞 2 小时后高效液相色 谱法测细胞内顺铂和紫杉醇药物浓度；Western Blot 检测 Bcl-2 蛋白的表达。 结果 MTT 比色法及台盼兰细胞计数法测定结果显示：在顺铂或紫杉醇浓度为 2.0μg/mL、20.0μg/mL 时，HeLa-M 细胞对顺铂或紫杉醇的抗性显著高于 HeLa 细胞、和 HeLa-C 细胞（p0.01）,当顺铂或紫杉醇浓度为 0.2μg/mL 时，三种 细胞对顺铂或紫杉醇的抗性无明显差别 (p0.05)。在顺铂或紫杉醇三种浓度 处理后，HeLa 细胞与 HeLa-C 细胞的药物抗性无显著差异（p0.05）。Annexin V/PI 双染色流式细胞术分析结果显示：在顺铂或紫杉醇浓度为为 2.0μg/mL、 20.0μg/mL 时，HeLa-M 细胞凋亡率明显低于 HeLa 细胞与 HeLa-C 细胞组 (p0.01)，当顺铂或紫杉醇浓度为 0.2μg/mL 时，三种细胞凋亡率相比无明显 差别(p0.05)。 在上述三种浓度处理后，HeLa 细胞和 HeLa-C 细胞凋亡率 无明显差异（p0.05）。高效液相色谱检测细胞内药物浓度显示：在顺铂或 紫杉醇浓度为 2.0μg/mL、20.0μg/mL 时，HeLa-M 细胞内顺铂浓度明显低于 HeLa 细胞与 HeLa-C 细胞组 (p0.01)，当顺铂或紫杉醇浓度为 0.2μg/mL 时，三种 细胞内药物浓度相比无明显差别(p0.05)。在上述三种浓度处理后，HeLa 细 胞和 HeLa-C 细胞内药物浓度无明显差异（p0.05）。Western Blot 显示： HeLa-M 细胞 Bcl-2 蛋白的表达明显高于 HeLa 细胞和 HeLa-C 细胞（p0.01）。 结论 1. 胞核 M-CSF 降低细胞内顺铂和紫杉醇的浓度, 增强人宫颈癌 HeLa 细胞对顺 铂和紫杉醇的抗性。 2. 胞核M-CSF上调人宫颈癌HeLa细胞Bcl-2蛋白的表达，抑制人宫颈癌HeLa细胞 ??凋亡。 关键词 巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)，人宫颈癌细胞，细胞凋亡，多药耐药 Effects of nuclear M-CSF on the sensitivity of anti-tumor chemotherapeutic drug in human cervical carcinoma HeLa cells ABSTRACT OBJECTIVE To investigate effects of nuclear M-CSF on the sensitivity of anti-tumor chemotherapeutic drug in human cervical carcinoma HeLa cells. METHODS Human cervical carcinoma HeLa cell, HeLa-M cell (pCMV/cyto/myc-M-CSF transfected-HeLa cell that highly expresses nuclear M-CSF, referred as to HeLa-M cell) and HeLa-C cell (vector pCMV/cyto/myc transfected HeLa cell, referred as to HeLa-C cell) were cultured for 48 h or 2 h. The cell viability was determined using MTT and Trypan blue assay. The apopotosis percentage was examined by flow cytometry using Annexin V/PI fluorescence staining. The concentration of intrac