胞外hsp60上调心肌tlr2和tlr4受体表达的研究-生理学专业论文.docxVIP

宁夏医科大学硕士学位论文 摘要 II 的主要信号分子“TLR4、MyD88、p38、JNK 和 NF-κB”，研究 HSP60 上调 TLR2/4 表达 的信号机制。 在整体大鼠心肌缺血模型中，结扎冠状动脉左前降支（LAD）造成心肌缺血以及静 脉注射 HSP60 抗体来中和封闭血浆中的 HSP60 后，通过 real-time PCR 和 Western blot 法检测心肌 TLR2/4 表达；ELISA 法和 Western blot 法检测血浆 HSP60。 研究结果 .在培养的大鼠 H9c2 心肌细胞系，外源性 HSP60 通过 TLR4-MyD88-JNK/NFκB 信 号通路介导上调 TLR2 和 TLR4 表达：外源性 HSP60 1 μg/mL 使得 TLR2 和 TLR4 mRNA 水平和蛋白表达量均显著上调；特异性阻断 HSP60 信号通路中的主要信号分子“TLR4、 MyD88、p38、JNK 和 NF-κB”结果表明，TLR4 siRNA、MyD88 抑制性多肽（Inhi MyD88）、 JNK 抑制剂 SP600125、NF-κB 抑制剂 PDTC 四种干预能够显著抑制外源性 HSP60 引起 的 TLR2 和 TLR4 表达上调，而 TLR2 siRNA 和 p38 抑制剂 SB203580 无显著效应，表 明 HSP60 上调 TLR2/4 表达的效应由 TLR4-MyD88-JNK/NFκB 通路所介导。TLR4 siRNA 不仅抑制 TLR4 表达，而且显著抑制 HSP60 引起的 TLR2/4 上调，TLR2 siRNA 仅仅抑 制 TLR2 表达，不影响 HSP60 引起的 TLR2/4 上调。 .在模拟缺血培养的大鼠 H9c2 心肌细胞，HSP60 出现在胞外，并且经 TLR4- MyD88-JNK/NFκB 通路参与介导模拟缺血所致 TLR2 和 TLR4 表达上调：在培养的大鼠 H9c2 心肌细胞，模拟缺血引起培液上清中出现 HSP60，即 HSP60 出现在胞外；同时， 模拟缺血引起 TLR2/4 表达上调，用抗体特异性封闭胞外 HSP60 或者阻断信号分子 TLR4 、 MyD88 、 JNK 和 NF-κB 能 够 显 著 抑 制 该 效 应 ， 表 明 “ 胞 外 HSP60-TLR4-MyD88-JNK/NFκB 通路”参与介导模拟缺血所致 TLR2/4 表达上调。 .在整体大鼠心肌缺血模型，HSP60 异常出现在血浆中，并且参与介导缺血所致心 肌 TLR2 和 TLR4 表达上调：在冠状动脉左前降支（LAD）结扎所致大鼠急性心肌缺血 模型，我们用 Western blot 和 ELISA 法均检测到 LAD 结扎 4 h 后血清中出现 HSP60，而 III 假手术组（sham）基本检测不到，表明心肌缺血引起 HSP60 异常出现在胞外； LAD 结 扎后 4 h，Western blot 法检测到左室前壁、左室后壁、右室以及室间隔中 TLR2 和 TLR4 受体表达水平均显著高于假手术组（sham），表明 LAD 结扎后，全心脏 TLR2 和 TLR4 表达上调；用 HSP60 抗体中和血清中的 HSP60，观察到能够显著抑制心肌缺血引起的 TLR2 和 TLR4 表达上调，而对照抗体 IgG 没有抑制效应，表明胞外 HSP60 参与介导心 肌缺血所致 TLR2/4 表达上调。 结论 1. 在培养的大鼠 H9c2 心肌细胞系，外源性 HSP60 上调 TLR2 和 TLR4 表达，该效 应由 TLR4-MyD88-JNK/NFκB 通路所介导。 2. 在 模 拟 缺 血 培 养 的 大 鼠 H9c2 心 肌 细 胞 ， HSP60 出 现 在 胞 外 ， 并 且 经 TLR4-MyD88-JNK/NFκB 通路参与介导模拟缺血所致 TLR2 和 TLR4 表达上调。 3. 在整体大鼠心肌缺血模型，HSP60 异常出现在血浆中，并且参与介导缺血所致 心肌 TLR2 和 TLR4 表达上调。 上述研究表明，心肌缺血时 HSP60 异常出现在胞外，胞外 HSP60 通过 TLR4- MyD88-JNK/NFκB 通路使得心肌细胞 TLR2/4 表达上调，该作用是缺血心肌 TLR2/4 表 达上调的机制之一。 关键词：TLR-2/4 ，HSP60，心肌缺血，TLR4- MyD88-JNK/NFκB 通路 宁夏医科大学硕士学位论文 英文摘要  PAGE 6 Study on the upregulated expression of TLR2 and TLR4 by extracellular HSP60 in cardiac myocytes ABSTRACT