ω-3多不饱和脂肪酸对脓毒血症大鼠急性肺损伤的影响研究-药理学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 5 些免疫细胞的功能[8]。尽管 ω-3 多不饱和脂肪酸受到广泛的关注和研究，但在 其关于对脓毒血症急性肺损伤的相关研究较少，那么将 ω-3 多不饱和脂肪酸应 用于脓毒血症的早期治疗中，是否可通过降低炎症反应和调节免疫功能而有效 减轻 ALI 的程度，并阻断肺组织 SIRS 乃至 MOF 的发生，从而降低患者死亡 率呢? 研究者还发现，核因子 κB（NF-κB）是细胞内信号转导通路中的重要信号 分子，正常情况下它是以非活化的形式存在于于细胞质中的，当受到理化因素 的刺激后，可被激活而发生转位并进入胞核，进而诱导各种细胞因子[白细胞 介素-8（IL-8）及肿瘤坏死因子 α（TNF-α）等]和黏附分子[细胞间粘附分子 -1(ICAM-1)及血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）等]参与炎症反应。 本实验拟通过盲肠结扎穿孔（CLP）复制脓毒血症的急性肺损伤动物模型， 并检测在 CLP 致伤以及 ω-3 PUFAs 干预后各组大鼠早期肺组织中 NF-κB 的表 达情况，进而探讨 ω-3 多不饱和脂肪酸（ω-3 PUFAs）对早期急性肺损伤（ALI） 的抑制作用及其作用机制，并为脓毒血症所致早期肺损伤的临床防治提供参考 依据。 材料和方法 一、实验材料和仪器 1.实验动物 健康清洁级雄性 SD 大鼠 30 只,体重 200～250 g(本校实验动物中心提供) 。 2.主要仪器与设备 1）MDF-192超低温冰箱：日本三洋公司 2）CX-201 超净工作台：蚌埠净化设备厂 3）水平、垂直电泳槽：美国 BIO-RAD 公司 4）DDY-12 型电泳仪：北京六一仪器公司 5）PH211 型数显 pH 计：意大利 HANNA 公司 6）纯水机：北京群先科技发展中心 7）旋涡混合器：太仓市科教器材厂 8）DK-8A 电热恒温水浴箱：上海医用恒温设备厂 9）隔水式电热恒温箱：上海医疗器械厂 10）FA2004 型电子分析天平：上海天平仪器厂 11）高速低温离心机：SIGMA 公司 12）TS－80S脱色摇床：北京仪诚科技公司 13）LDZX-40B I 型自动电热压力蒸汽灭菌器：上海申安医疗器械厂 14）电热恒温鼓风干燥箱：上海跃进医疗器械厂 15）ChemiDocXRS 成像系统：美国 BIO-RAD 公司 16）TSJ-Q 型自动封闭式组织脱水机：常州市中威电子仪器厂。 17）Sakura 组织包埋机：日本制造 18）LEICA RM2235 型石蜡切片机：德国制造。 19）PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪：常州市中威电子仪器厂 20）101－2 型电热恒温鼓风干燥箱：上海跃进医疗器械厂 21）HPC-1001 （18cm）不锈钢高压锅：福州迈新生物技术开发有限公司 22）OlympusBX50 生物显微镜：日本制造 23）OlympusBX50 显微摄影显微镜：日本制造 24）MDF-192 超低温冰箱：日本三洋 25）病理图像分析系统 备注：[（16）-（25）]由本校附属医院病理科提供。 3.主要试剂与药品 1）细胞裂解液购自碧云天（型号 P0013） 2）鼠单克隆抗体为Santa公司产品（型号SC-8008） 3）辣根酶标记山羊抗大鼠IgG购自中杉金桥公司（型号ZB-2307，批号87054） 4）β-Actin(C4):sc-47778购自Santa公司 5）ω-3多不饱和脂肪酸购自华瑞公司 6）化学发光液购自Millipore公司 7）显影液及定影液为Kodak 公司产品 8）麻醉药品 2%戊巴比妥钠 9）75%医用酒精 10）盐酸产自上海第二化工厂 11）冰乙酸产自上海第二化工厂 12）无水乙醇产自上海第二化工厂 13）异丙醇上海第二化工厂 14）氯仿上海第二化工厂 15）浓盐酸、浓硫酸、冰乙酸、85%(w/v)磷酸武汉化学试剂总厂 16）脱脂奶粉产自武汉扬子江奶业公司 17）吸水滤纸，PVDF 膜购自美国 3M 公司 18）WB 曝光底片产自 Kodak 公司 4.主要试剂配伍 1）PBS 缓冲液：0.27g KH2PO4，8g NaCL，l.42g Na2HPO4，0.2 g KCL，溶于 800ml 双蒸水中，充分搅拌溶解，调节 pH=7.4，最后加双蒸水定容至 1000ml， 高压蒸汽灭菌，室温保存。 2）10% SDS：20gSDS 溶于水定容至 200ml，调节 pH 至 7.6，室温保存。 3）0.5M EDTA(PH8.0)：称取 186.lg EDTA-NA2·2H2O 溶于 800ml 双蒸水中， 加入约 20g 固体 NaOH，然后调节 pH 至 8.0，最后定容至 1 升，室温保存。 4）30%丙烯酰胺溶液：将 29g 丙烯酰胺和 1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体 PAGE