药用植物太子参3种病害病原鉴定与病害分析.docVIP

药用植物太子参3种病害病原鉴定与病害分析 　　摘要：2014―2015年，在贵州省黔东南州太子参（Radix pseudostellariae）发现了2种新的真菌病害和1种生理性病害。经实地调查、组织分离和显微鉴定，在发病块茎上得到主要致病菌博宁刺盘孢（Colletotrichum boninense）和尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum），在病叶上得到的致病菌为茄匐柄霉（Stemphylium solani），同时还发现因棚内光照过强导致生理性病害高温日灼病。 　　关键词：太子参；腐烂病；褐斑病；高温日灼病；病原 　　中图分类号： S435.675 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）07-0177-03 　　太子参（Pseudostellaria heterophylla）为石竹科植物异叶假繁缕的块根，别称孩儿参、童参、四叶参等，属常用滋补类药材，具有补气益血、生津、补脾胃等作用。太子参已被我国卫生部列入可用于保健食品的中药材名单，为名贵中药材。近年来，太子参在治疗肝炎、糖尿病、冠心病、白细胞减少症、甲亢、淋巴结核等疑难病症方面取得了新的进展[1]。由于市场需求量的增加，贵州省黔东南州的太子参种植面积和区域迅速扩大，连作面积不断增加，块茎、叶片常出现真菌病害，某些真菌病害危害逐年加重，导致太子参减产15%～50%[2]。对太子参真菌病害进行深入研究具有重要意义。太子参病毒病、白绢病、立枯病、根腐病、叶斑病是太子参的常见病害[3-8]。2014―2015年，贵州昌昊中药发展有限公司太子参种植地发生了腐烂病、褐斑病2种真菌病害以及高温日灼病，其中褐斑病、高温日灼病是首发病害，给太子参产业造成一定的经济损失，本研究现对3种病害进行报道。 　　1 材料与方法 　　室外调查于2014年4月至2015年3月在贵州昌昊中药发展有限公司太子参种植地进行。室内试验在中国科学院遗传所实验室进行。2014年4月至2015年3月在贵州昌昊中药发展有限公司太子参种植地调查和采集标本，记录病害发生的特点和症状，并采集新鲜标本用于病原分离和鉴定。 　　1.1 材料 　　PSA培养基、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、移植针、显微镜、电磁炉、微波炉等。工业乙醇、70%乙醇、0.1% HgCl2溶液、95%链霉素。 　　1.2 方法 　　1.2.1 症状的观察和描述 观察并描述太子参病组织的表面病斑形态、颜色、大小及危害程度等，并对发病部位进行拍照。 　　1.2.2 病原菌的分离纯化和培养 采用组织分离法对太子参发病块茎进行病原菌分离，切取块茎病组织3块，倒置于37 ℃培养2～3 d。挑菌落并继续分离纯化，直至获得纯培养。对显微镜下病原菌进行拍照，并对菌丝和孢子大小进行测量、记录。切取病叶组织4～5 mm小块，置于70%乙醇中浸2～3 s，接着将病组织移入0.1% HgCl2溶液中浸2 min；最后将病组织转移到无菌水中漂洗3遍，并将组织移到PSA培养基上培养。将培养皿置于28 ℃电热恒温箱里培养3～5 d，挑取组织周围的菌丝放进加有链霉素的培养基平板上继续培养5～7 d，获得纯培养，再对显微镜下的病原菌进行拍照，并测量、记录菌丝、孢子大小。 　　1.2.3 生理性病害的诊断 因发病部位没有致病菌，所以主要观察发病症状并调查环境条件。 　　2 结果与分析 　　2.1 太子参腐烂病 　　2.1.1 太子参腐烂病的症状观察与描述 太子参腐烂病发病的主要部位为地下根部。病部首先出现褐色水渍状病斑，病斑很快扩展凹陷，病部呈黄褐色，长约0.5 cm，病健交界处明显。此病害发展迅速，可导致太子参根部腐烂变质，田间发病时，以发病部位为中心向四周迅速蔓延（图1）。 　　2.2.2 病原菌的形态特征 该菌菌落絮状，平铺，背面橘黄色；菌丝稀疏，初期白色，后期暗褐色，分生孢子单胞，无色，圆柱形，多数一端钝圆，一端稍尖，内有2个油球，具脐点，大小为（7.0～10.0）μm×（5.0～8.0）μm。采用16S rDNA测序和形态学鉴定的方法对所得菌株进行鉴定[8]，结果表明，病原菌为博宁刺盘孢（Colletotrichum boninense）（图2），属于真菌门半知菌亚门黑盘孢目黑盘孢科刺盘孢属真菌。 　　菌丝透明，具分隔，在侧生的孢子梗上长出孢子。大型孢子镰刀形，略弯，向两端均匀变尖，1～3个隔膜，多数为3个隔膜，大小为（21.0～28.0）μm×（2.5～4.0）μm。产孢细胞短，在菌丝上直接产生或者在分生孢子座上呈丛生状。小型孢子圆形或椭圆形，单胞，数量多，假头状着生于产孢细胞上，大小为（5.0～12.0.0）μm×（2.0～3.5）μm。采用16S rDNA测序和形态学鉴定方法对所得菌株进行鉴定