葡萄9个重要花发育相关基因在藤稔葡萄夏芽成花过程中表达分析.docVIP

葡萄9个重要花发育相关基因在藤稔葡萄夏芽成花过程中表达分析 　　摘要:利用荧光定量PCR技术对9个葡萄花发育相关基因在藤稔葡萄夏芽成花过程中的表达进行分析。所研究的基因包括:Vitis vinifera AGAMOUS (VvAG)Vitis vinifera APETALA 3(VvAP3)、Vitis vinifera FLOUW ERING LOCUSC(VvFLC)、Vitis vinifera FRUITFUL(VvFUL)、Vitis vinifera FLOW ERINGLOT(VvFT)、Vitis viniferaAPTALA2(VvAP2和Vitis vinifera SUPPRESSOR OF DVER EXPRESSION OF CO 1(VvSOCI)、Vitis vinifera APETALAI(VvAPI)以及Vitis vinifera LEAFY(VvLFY)。结果表明,经摘心处理的夏芽能够进行花芽分化及花芽形成,而未经处理的对照组夏芽未形成花芽;9个基因在处理与对照夏芽及发育枝茎尖中的表达存在一定的差异,其在处理样品中的表达与拟南芥中同源基因的表达基本相符。该研究对于深入了解葡萄花发育的分子机理。相关基因在转基因中的利用以及其表达的合理调控等具有重要的理论指导意义。 　　关键词:葡萄;基因;夏芽;成花过程;表达 　　中图分类号:S663.1　文献标识码:A　文章编号:1009-9980(2010)06-892-06 　　 　　花是果树结实的前提,花的发育与开花是高等植物生殖生长时期最明显的特征之一,是植物个体发育的中心环节,深入研究果树花芽发育(包括花芽诱导和花芽分化)的机理具有重要意义。植物的任何性状本质上都是由相关基因控制的,植物花发育的遗传机理也是许多基因相互作用与共同调控的过程。而且,这些花发育相关基因又有上游基因与下游基因之分。随着分子生物学的快速发展,有关植物花发育分子机理的研究不再局限于拟南芥和金鱼草等模式植物。模式植物中花发育相关基因的克隆与功能分析更是为认识果树花发育同源异型基因的功能打开了大门。 　　葡萄是世界性的重要果树之一,也是继拟南芥、水稻、杨树之后完成全基因测序的第4种开花植物,开展葡萄花发育的研究不仅有助于从分子水平上揭示葡萄花芽发育的本质,为葡萄生产提供理论指导,而且对于促进葡萄基因组(尤其是功能基因组)的研究也具有积极意义。葡萄全基因组的测序更是为开展葡萄分子生物学研究提供了优势条件。早在2000年,Boss等预测在随后的20 a里对葡萄基因以及基因功能的认识将促进通过基因工程手段对葡萄结果能力、果实成熟期、以及植株生长习性等进行更有效调控时期的到来。从基因水平上调控葡萄的结实能力,不仅可以调控葡萄蔓上芽的结果潜力,而且还可以调控某一条蔓上花序的数量、结构与大小。所有这些,不仅影响到葡萄产量与品质,而且影响到田间管理的操作。可以说,要达到上述目的。离不开对葡萄花芽形成分子机理的深入认识以及基因水平上的调控。 　　葡萄的芽从结构与生长特点上有冬芽与夏芽之分。葡萄在生长季节经过适当的处理(如摘心)其当年生夏芽与冬芽可以在短时期内(一般为1个多月)完成花发育并开始结果,这极大地方便了对葡萄花芽发育机理的研究。而开展葡萄成花研究还有望达到发现新基因或者认识同源基因不同功能的目的。我们在已克隆出的花发育相关基因的研究基础上,利用葡萄夏芽快速进行花发育的条件初步研究了VvLFY、VvAPl、VvAP2、VvFLC,VvSOCl、VvFUL、VvAP3、VvFT、VvAG等9个基因在夏芽至花序形成过程中的表达特征,为更进一步全面认识葡萄花发育提供理论依据。 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1.1　材料 　　1.1.1　植物材料研究所用葡萄植株是南京农业大学江浦实验基地种植的树龄为6a生的藤稔葡萄,为避免第1次果生长对试验的影响以及降低未处理对照夏芽花芽形成的可能性,根据实际生产中经验,新梢摘心处理时间为2009年7月16日。选取9～10节长度的葡萄二次副梢,采取摘心和抹去1～6节位腋芽的方式处理,正常生长状态的二次副梢作为对照。 　　试验从处理之日起分6次进行采样,每隔4~6d取1次样,为保证有花分生组织的存在,在处理副梢顶部2个芽萌发后出现花序以前采取茎尖,而在花序出现后(即花序着生节位出现后)直接采取花序。 　　1.1.2　基因序列与引物设计根据其在拟南芥成花途径网络中的位置推测,9个葡萄花发育相关基因可能在葡萄成花途径中也处于中游或下游,根据Genbank上发表的不同品种的葡萄基因序列,选择保守区域设计引物,为确保定量PCR的特异性以及避免定量RT-PCR结果的假阳性,除VvLFY基因启动子外其他8个基因引物设计在每个基因的3’非