胃癌组织中检测GSTπTopoII及Pgp基因蛋白与术后化疗关系临床病理研究.docVIP

胃癌组织中检测GSTπTopoII及Pgp基因蛋白与术后化疗关系临床病理研究 　　摘 要 目的：探索胃癌组织中检测GSTπ、TOPOII及Pgp基因蛋白与术后化疗之间的关系，为临床选择化疗药物提供重要依据。方法：利用免疫组织化学方法对胃癌组织中相关耐药蛋白进行标记，观察和分析胃癌细胞的耐药基因蛋白表达情况。结果：890例胃癌组织中，GSTπ强阳性（+++）824例，阳性（++）52例，弱阳性（+）13例；Pgp强阳性（+++）807例，阳性（++）69例，弱阳性（+）14例；TopoII强阳性（+++）664例，阳性（++）74例，弱阳性（+）58例；GSTπ、TopoII及Pgp基因蛋白表达与胃癌分型的关系，本组病例中主要以中分化和低分化腺癌强阳性表达为主，其他类型以阳性或弱阳为主；GSTπ、TopoII及Pgp基因蛋白表达与术后常规使用化疗药物患者强阳性表达的术后生存时间短，弱阳性表达的时间长；GSTπ、TopoII及Pgp基因蛋白表达与术后不使用或小剂量使用化疗药物患者强阳性表达的术后生存时间短，阳性或弱阳表达的患者术后生存时间略长；通过观察发现，胃癌组织中GSTπ、TopoII及Pgp基因蛋白阳性表达高达90%以上，最低为70%以上的高表达，术后使用化疗药物与不使用化疗药物患者的生存时间的长短无明显差异，胃癌患者术后普遍生存时间短。结论：胃癌患者术前化疗与术后针对性化疗相结合，可减少胃癌细胞的多耐药性的产生，提高化疗效果。 　　关键词 胃癌组织 多药耐药 基因蛋白 表达 个性化靶向治疗 　　 　　胃癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人们的身体健康，胃癌发病率有逐年增高的趋势。胃癌的治疗，除手术切除原发病灶外，还需使用化疗或放疗等辅助治疗，通过长时间的临床病理观察，胃癌的治疗效果并不明显，患者存活时间短，生活质量不高，巨额的治疗费用增加了患者的精神及经济负担，通过我们长时间的临床观察发现，不同患者胃癌组织中耐药基因蛋白GSTπ、TopoII及Pgp表达有一定差别，不同胃癌患者术后使用同一种化疗药物，统一药物剂量，统一用药疗程，治疗的效果完全不一样，主要原因是癌组织细胞对化疗药物产生多耐药性。癌组织细胞多耐药性（MDR）是影响化疗效果的主要原因之一，一旦癌细胞对一种化疗药物产生耐药性后对非同一类型的多种结构、作用方式不同的抗癌药物也会产生交叉耐药性。利用免疫组织化学方法对胃癌相关耐药蛋白进行标记，观察和分析癌细胞对耐药基因蛋白表达情况，为临床选择化疗药物提供重要依据。 　　资料与方法 　　本组患者890例，男710例，女180例，年龄21～73岁，平均年龄54岁，从发现症状到就诊的时间1周～3年，均有消化不良，嗳气、返酸、体重减轻等临床症状。临床分期：Ⅰ期T1N0M0 351例，Ⅱ期T0-1N1M0 173例，Ⅲ期T2N1-3M0 286例，Ⅳ期80例。890例患者均行手术治疗，其中单纯肿块切除15例，胃癌根治术875例，胃小弯、胃大弯、幽门上、幽门下淋巴结无癌细胞转移295例，胃小弯、胃大弯、幽门上、幽门下淋巴结有癌细胞转移595例。 　　临床病理分类：参照WHO及有关文献，以《外科病理学》上册及病理诊断图谱为诊断依据，对890例胃癌组织进行分类：①肉眼观察，胃癌肿物分为蕈伞型23例，表浅溃疡型5例，皮革胃13例，浸润溃疡型849例，肿物切面灰白色，与周围组织边界不清，质地硬、脆。②组织学分型：890例胃癌中，高分化腺5例，中分化腺癌426例，低分化腺癌443例，黏液腺癌15例，腺鳞癌1例。 　　试验方法。第1步：石蜡切片和水化后，用PBS液冲洗3次，每次3分钟。第2步：根据每一种抗体的要求对抗原进行相应的修复。第3步：如果有必要每张切片加1滴或50ul过氧化酶阻断溶液（试剂A），室温孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗3次，每次3分钟。第4步：除去PBS液，每张切片加1滴或50ul的第一抗体，室温下孵育60分钟或4℃过夜。第5步：PBS液洗3次，每次3～5分钟，除去PBS液，每张切片加1滴或50ul即用型Maixin试剂，室温下孵育10～15分钟，PBS冲洗3分钟。第6步：除去PBS液，每张切片加2滴或100ul新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3～5分钟。第7步：自来水冲洗，苏木素复染，PBS液或自来水冲洗返蓝，经梯度酒精脱水干燥，中性树胶封固。 　　结果判断：GSTπ，Pgp阳性物质均位于细胞核及细胞浆内，而TopoII阳性物质位于细胞核，呈棕黄色颗粒，计数阳性细胞≥25%弱阳性（+），≥50%阳性（++），≥75%强阳性（+++），对着色强弱未作详细比较，各例蜡块处理及所取得的肿瘤组织面积以及切片切到肿瘤细胞的数量均有不一致的可能，每次购置的DAB试剂颜色的深浅也有差异