葛根上调肝胰岛素抵抗HepG2细胞OB―R IRS2,GLUT1和GLUT2蛋白调节糖代谢研究.docVIP

葛根上调肝胰岛素抵抗HepG2细胞OB―R IRS2,GLUT1和GLUT2蛋白调节糖代谢研究 　　[摘要] 研究中?葛根对人肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗（IR）模型糖代谢的改善作用并初步探讨葛根降糖的分子作用机制。该实验采用课题组优化方法，1×10-9 mol?L-1胰岛素加3.75×10-6 mol?L-1地塞米松联合给药HepG2细胞48 h建立稳定的IR模型；CCK-8法检测葛根含药血清对细胞活性的影响；葡萄糖氧化酶法检测多个时间点（12，15，18，21，24，30，36 h） IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量；蒽酮法检测细胞内糖原含量；Western blot法检测胰岛素受体底物2（IRS2）、瘦素受体（Ob-R）、葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）和GLUT2蛋白表达水平。研究结果显示葛根含药血清（5%，10%，15%）对IR-HepG2细胞的活力没有明显的影响；5%和10%葛根含药血清在给药18，21，24 h均显著上调IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量（P0.01），15%葛根含药血清除给药15 h上调葡萄糖消耗量较弱（P0.05），18，21，24，30 h都显著上调葡萄糖消耗量（P0.01），呈现一定程度剂量依赖性。葡萄糖消耗时效实验确认24 h是最佳时间点，进一步研究发现葛根含药血清作用24 h增加胞内糖原含量（P0.01）；上调IRS2，Ob-R，GLUT1和GLUT2蛋白表达量。葛根含药血清降糖作用可能部分通过上调Ob-R和IRS2蛋白表达来调节以PI3K/PDK为中心的胰岛素信号通路；上调IR-HepG2细胞GLUT1和GLUT2表达量，加速葡萄糖转运进入肝细胞中并增加糖原合成来增强IR-HepG2细胞的胰岛素敏感性来实现的。 　　[关键词] 胰岛素信号通路； 胰岛素受体底物2（IRS2）； 瘦素受体（Ob-R）； 葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）；GLUT2 　　[Abstract] To observe the anti-hyperglycemic effect of Puerariae Lobatae Radix in hepatocyte insulin resistance（IR） models， and investigate its preliminary molecular mechanism. IR-HepG2 cell model was stably established with 1×10-9 mol?L-1 insulin plus 3.75×10-6 mol?L-1 dexamethasone treatment for 48 h according to optimized protocol in our research group. After IR-HepG2 cells were treated with different concentrations（5%，10% and 15%） of Puerariae Lobatae Radix-containing serum， cell viability was detected by CCK-8 assay； the glucose consumptions in IR-HepG2 cells were separately detected at different time points （12， 15， 18， 21， 24， 30， 36 h） by using glucose oxidase method； intracellular glycogen content was detected by anthrone method； and the protein expression levels of leptin receptor （Ob-R）， insulin receptor substrate-2 （IRS2）， glucose transporter 1（GLUT1） and GLUT2 were detected by Western blot assay. The results showed that Puerariae Lobatae Radix-containing serum （5%， 10% and 15%） had no significant effect on IR-HepG2 cell viability； 5% and 10% Puerariae Lobatae Radix-containing serum significantly increased glucose consumption of IR-HepG2 cells （P 　　[Key word