葛根总黄酮对大强度耐力训练大鼠红细胞抗氧化能力和ATP酶活性影响实验研究.docVIP

葛根总黄酮对大强度耐力训练大鼠红细胞抗氧化能力和ATP酶活性影响实验研究 　　摘要：目的：探讨葛根总黄酮对大强度耐力训练大鼠红细胞抗氧化能力及红细胞膜ATP酶（ATPase）活性影响的机理。方法：建立大强度耐力训练动物模型，测试大鼠红细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH?Px)、过氧化氢酶(CAT)活性，还原型谷胱甘肽含量（GSH）和丙二醛(MDA)含量。结果：灌服葛根总黄酮组大鼠力竭运动后红细胞SOD、GSH?Px、CAT酶活性和GSH含量较显著高于训练对照组（P0.05）；MDA的含量极显著低于训练对照组（P0.01）；红细胞膜ATPase活性较显著高于训练对照组（P0.05）。结论：葛根总黄酮可以改善长时间大强度耐力运动中红细胞的氧化应激水平，保护膜上ATPase的活性，有利于运动中红细胞结构和功能的完整性，可作为耐力运动员的运动补剂进行深入的开发和利用。 　　关键词：葛根总黄酮；耐力训练；红细胞；抗氧化能力 　　中图分类号：G804.7文献标识码：A文章编号：1007-3612(2008)02-0193-03 　　 　　本实验就葛根总黄酮对大强度耐力训练大鼠红细胞产生的自由基清除效果和对红细胞膜ATPase活性的保护作用机制进行深入研究，旨在阐释葛根总黄酮保护运性红细胞损伤的机制，并为其应用提供理论依据和实验支持。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1实验材料与对象实验材料为太白野葛根，通过冷浸法［1］提取葛根总黄酮，然后用灭菌双蒸水配制成浓度为150 mg/mL的悬浮液。 　　实验对象为SD雄性大鼠（由陕西中医研究所实验动物饲养中心提供）24只，体重180 g-220 g，两月龄，适应性饲养3 d并筛选出不能训练的异常大鼠。 　　1.2实验方法将大鼠随机分为安静对照组（安静组）、大强度耐力训练组（训练组）和训练服药组（训练服药组）。按实验组分笼饲养，饲养室温度为25℃左右，湿度为(58.92±1．77)%，照明随同自然变化。安静组安静饲养，自由饮食、摄水；训练组和训练服药组于动物跑台上先进行5周的适应性训练，然后进行2周大强度耐力训练。适应性训练期间每天训练20 min，每周5d，坡度为0，跑速每周递增，分别为15 m/min，22 m/min，27 m/min，31 m/min和35 m/min，共5周；强化训练期间每天训练30 min，每周7 d，坡度为0，速度为35 m/min，共2周。训练的同时服药组大鼠每日早8:00用葛根总黄酮悬浮液灌胃，给药量以500 mg/kg体重计算，每天0.8 mL灌服一次，对照组大鼠灌服同样剂量的蒸馏水。 　　1.3取材及样品制备 　　1.3.1取材力竭运动后即刻，用20%乌拉坦（0.5 mL/kg体重）腹腔麻醉后，腹股静脉采5 mL抗凝全血。 　　1.3.2样品制备红细胞的制备：取肝素抗凝全血1 500～2 000 rpm/min 4℃离心5 min，除去血浆和灰白色的白细胞层，按1:2体积加入生理盐水，混合后反复洗涤3次，离心条件同上，除去上清夜留压积红细胞。分离好的红细胞于-20℃冰箱冻存。 　　红细胞膜样品制备：取上述沉淀的红细胞按1/10 (v/v)加入预冷的破膜液(0.1mmol/LEDTANa, 2.5 mmo1/L NaHPO4, 0.03 m mol/L PMSF, PH 7.4-8.0)，均匀搅拌2 min，待完全溶血后，以12 000 rpm/min 4℃离心10 min，将沉淀重复依上法再洗涤3次，弃去上清及离心管底部褐色的纤维状沉淀物，收集乳白色的红细胞膜样品，取50μL用考马斯亮兰试剂做蛋白定量，将红细胞膜用低渗液（破膜液）配成蛋白含量为2 mg/mL左右的悬液，将上悬液分装到小容器中，-20℃冰箱冻存。 　　1.4测试指标及方法谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、ATPase（超微量分型）各测试指标均采用南京建成试剂盒进行测试，测试方法严格按照试剂盒说明书进行。 　　1.5数据处理实验所得数据均采用SPSS12.0统计软件对所测数据进行组间双尾ｔ检验，实验数据均以平均数±标准差(X±SD) 来表示。 　　 　　2结果 　　 　　2.1葛根总黄酮对大强度耐力训练大鼠红细胞抗氧化能力的影响 　　 　　注：▲代表安静组与训练组比较，▲代表具有较显著性差异（P0.05），▲▲代表具有极显著性差异（P0.01）；#代表训练组与训练服药组比较，#代表具有较显著性差异（P0.05），##代表具有极显著性差异（P0.01）。 　　由表1结果显示，训练组大鼠在力竭运动后，红细胞抗氧化指标SOD、CAT、