脂肪干细胞在皮肤组织工程中研究应用进展.docVIP

脂肪干细胞在皮肤组织工程中研究应用进展 　　[摘要]组织工程皮肤作为一种皮肤组织替代物，主要用于覆盖和修复损伤缺损的皮肤组织，以改善其形态和功能。其中，种子细胞、支架材料及细胞因子是皮肤组织工程研究的三要素。脂肪干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）具有来源丰富、取材方便、低免疫原性、易扩增等优点，是皮肤组织工程较为理想的种子细胞。本文就ADSCs在组织工程皮肤中，包括创面修复、抑制瘢痕增生等的相关应用研究进展及前景进行综述。 　　[关键词]脂肪干细胞；皮肤组织工程；种子细胞；修复 　　[中图分类号]R644 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2016）06-0030-04 　　皮肤作为人体最大的组织器官，覆于体表，起到维持机体内环境稳定、阻止外界有害物质入侵等十分重要的作用。临床上，自体皮源的缺乏常致大面积烧伤和严重创伤患者创面难以及时修复，严重影响机体的形态和功能，甚至危及到患者生命。近年来，随着组织工程技术及有关生命科学的不断发展而兴起的组织工程皮肤替代物，不仅能够及时覆盖创面，减少体内水分及电解质的丢失，维护内环境的稳定，而且还能够减少创面愈合远期瘢痕的增生，改善创面的外观和患者的身心健康。因此，组织工程化皮肤具有广阔而深远的临床应用前景。 　　种子细胞、支架材料及细胞因子是皮肤组织工程研究的三要素。近年来，有可能作为种子细胞的干细胞拥有良好的多分化潜能及细胞因子分泌功能，己越来越被研究者所重视。干细胞的主要来源有胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞和脂肪干细胞等，但因胚胎干细胞有一定的免疫原性、涉及一定的伦理学问题，骨髓干细胞（bolle marrow stem cells，BMSCs）来源少、取材时创伤大，极大地限制了它们的临床应用，脂肪干细胞（adiposed derived stem cell，ADSCs）具有来源丰富、取材方便、低免疫原性、易扩增等优点，成为目前皮肤组织工程较为理想的种子细胞之一。本文就ADSCs在组织工程皮肤中的相关应用研究进展及前景进行综述。 　　1.ADSCs的分离培养及生物学特性 　　1.1ADSCs的分离纯化：ADSCs主要来源于人体脂肪组织，其提取及培养步骤相对较多，在分离的基础上结合相应的纯化方法，便能够得到纯度相对较高的脂肪干细胞。 　　ADSCs分离方法主要沿用了问充质干细胞的分离流程，包括酶消化法及非酶促分离法两大类。酶消化法的主要原理是通过胶原酶消化细胞间的胶原组织，使细胞相互分离，再通过过滤、洗涤和离心等步骤分离获得脂肪干细胞，分离速度较快，缺点是胶原酶较为昂贵，而且在酶的种类、所需浓度及作用时间上缺乏统一标准，需要靠操作者凭借个人的经验来判断。非酶促分离法包括组织块贴壁法、直接离心法、吸附柱法等其中，贴壁法需要解决的主要问题是组织块贴壁难，换液时容易漂浮，如果这一问题能够被有效地解决，其将是一种应用前景十分可观的分离方法；吸附柱法是利用聚乙烯织物等做成的吸附柱装置对贴壁细胞的亲和力作用而分离脂肪干细胞，虽然价格相对低廉，但需要样品量较大。上述的各种ADSCs分离方法各有优缺点，尚无统一的标准，因此寻找一种操作简单、成本低廉的ADSCs分离方法仍是未来ADSCs研究领域的重要内容。 　　分离后为了得到纯度较高的ADSCs，紧接着便是ADSCs纯化。目前常用的ADSCs纯化方法包括：免疫磁珠分选和密度梯度离心法，由于免疫磁珠分选法涉及到的设备及抗体均比较昂贵，不适合普通的研究机构广泛应用，而密度梯度离心的方法虽然步骤相对较繁琐，但成本会低很多，因此其是相对较为理想可行的纯化方法。 　　1.2ADSCs的表面标志物：虽然目前对ADSCs免疫表型的鉴定做了大量工作，但ADSCs的表面标志物繁杂，尚未发现特异性的可用于鉴别的表面标志物。现普遍认为ADSCs表达CD13、CD71、CD73、CD29、CD90、CD105和CD166等表面抗原标志，而不表达CD11、CD19、CD31、CD33、CD38、CD45等。表达CD73、CD105和CD90，不表达CD45，并在体外能够诱导分化成为脂肪细胞、成骨细胞和成软骨细胞，是ADSCs作为人类间充质干细胞的最低标准。 　　1.3ADSCs的多向分化潜能：自2001年首次从人脂肪中成功分离并得以体外培养以来，ADSCs能够在一定条件下被成功诱导分化为内胚层、中胚层及外胚层的众多细胞系，如肌肉细胞、骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞以及角质细胞、成纤维细胞和内皮细胞等，具有多向分化潜能例如，在一定条件下ADSCs能够诱导分化为肝细胞样细胞，不但能够表达产生白蛋白和甲胎蛋白，还拥有吸收低密度脂蛋白LDL、储存糖原等类似人类肝脏细胞的功能。而早年Safford等人就分别通过实验研