在MJ Chromo4实时荧光系统通过反转录定量RTqPCR对基因表达进行分析要点.docxVIP

在MJ Chromo4实时荧光系统通过反转录定量（RT-qPCR）对基因表达进行分析 反转录 HYPERLINK /yp/product-list-128.html \t _blank 定量PCR(RT-qPCR)具有很高的灵敏性和非常好的动力学检测范围，为基因表达分析提供了一个基准。应用这一技术可以通过荧光强度变化对PCR反应产物进行实时监测。传统的方法，如溴化乙锭染色或放射性核素掺入标记后的光密度扫描等，测定的都是PCR的终产物，而实时荧光定量技术能够对起始摸板进行定量，与传统方法相比实时荧光定量技术显出了极大的优势。 所谓的实时荧光 HYPERLINK /yp/product-list-128.html \t _blank 定量PCR就是通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量PCR反应中，引入了一种荧光化学物质，随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图(如图1)。 图1实时荧光扩增曲线图 一般而言，荧光扩增曲线扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，我们无法判断产物量的变化。而在平