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藏药余甘子药材及其鞣质部位指纹图谱评价研究 　　[摘要] 建立不同产地藏药余甘子药材及其鞣质部位HPLC指纹图谱。采用Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，甲醇-0.2%冰醋酸水溶液为流动相梯度洗脱，流速1 mL·min-1，柱温30 ℃，检测波长260 nm。提取13个色谱峰为药材指纹图谱共有峰，11个色谱峰为鞣质部位指纹图谱共有峰，采用对照品指认了5个主要色谱峰，运用相似度评价软件对所收集的8个不同产地藏药余甘子药材及其鞣质部位进行系统比较与归类，8个余甘子药材相似度在0.763～0.993，鞣质部位相似度在0.903～0.991，通过聚类分析、主成分分析将不同产地的余甘子药材和鞣质部位分别聚为3类。该法重复性好，简便可靠，为不同产地藏药余甘子药材及其鞣质部位质量控制和评价提供依据。 　　[关键词] 藏药；余甘子；鞣质部位；HPLC指纹图谱；质量评价 　　余甘子为大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果实，2000年版《中国药典》开始将其列为藏药收载，余甘子主要用于血热血瘀、消化不良、肝炎、咳嗽、喉痛、口干等的治疗，现代药理证明它有降脂、降血糖、抗氧化、抗癌等多种作用，在许多民族药中都有应用。 　　余甘子主要含鞣质及酚酸类成分，未成熟果实鞣质含量达30%～35%，干燥果实含鞣质14%左右，现代研究表明鞣质具有抗脂质过氧化、抗肿瘤、抗癌、护肝益肾、抗病毒、抗菌等药理活性作用，这些与余甘子的药理作用一致。目前对余甘子的质量控制主要有HPLC测定没食子酸、鞣花酸、柯里拉京、诃黎勒酸、粘酸-2-O-没食子酸酯等成分的含量[1-5]，分光光度法测定总鞣质含量[6-7]。余甘子主要产于尼泊尔、印度和我国南方地区，藏药中以个大肉厚的尼泊尔余甘子为上乘，很少用果小肉薄的云南等内地药材。 　　中药指纹图谱能同时反映中药化学成分和它们之间的比率，可以比较全面地反映中药材质量。为了有效控制余甘子质量，本论文在报道测定比较8个不同产地余甘子中5个主要单体成分诃黎勒酸（chebulagic acid）、粘酸-2-O-没食子酸酯（mucic acid 2-O-gallate）、没食子酸（gallic acid）、柯里拉京（corilagin）、鞣花酸（ellagic acid）及总鞣质含量基础上，建立了8个不同产地余甘子药材及其鞣质部位的HPLC指纹图谱，通过与对照品对照、相似度评价、聚类分析、主成分分析等方法对所收集的8个不同产地余甘子药材及其鞣质部位进行分析归类，为藏药余甘子的合理用药和质量控制提供依据。 　　1 材料 　　Waters 1525型高效液相色谱仪；Waters 2996型DAD检测器；Empower软件；25 μL可调进样器；1/10万电子分析天平（Sartorious BT 25S型，北京赛多利斯仪器有限公司）；KQ-500DE超声波清洗器（100 W， 昆山超声仪器有限公司）。甲醇（Fisher，色谱纯）；蒸馏水（屈臣氏）；其他试剂均为分析纯。 　　余甘子药材购自北京藏医院（产地尼泊尔）、河北安国药材市场（产地云南）和安徽亳州药材市场（产地印度、福建、广西、四川、贵州、新疆），经北京中医药大学生药系阎玉凝教授鉴定为大戟科植物P. emblica的干燥果实。鞣质部位由本实验室建立的稳定制备工艺制备，水提取样品，上大孔树脂纯化，得到鞣质部位的鞣质含量为54.3%。诃黎勒酸、没食子酸、粘酸-2-O-没食子酸酯、柯里拉京、鞣花酸对照品，均为自制，经UV，IR，MS，1H，13C-NMR鉴定结构，HPLC检测，峰面积归一化法测定纯度大于98.50%，符合定量要求。 　　2 方法与结果 　　2.1 液相色谱条件 　　Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温30 ℃；流动相为甲醇-0.2%冰醋酸水；流速1 mL·min-1；检测波长260 nm；洗脱梯度见表1。 　　2.2 样品液的制备 　　2.2.1 药材样品液制备 　　称取不同产地余甘子药材粉末（过50目筛）约200 mg，精密称定，置100 mL锥形瓶中，加入50% 甲醇50 mL，称重，100 MHz超声60 min，补足失量，滤过，取续滤液2 mL置10 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，备用，进样前经0.45 μm微孔滤膜滤过。 　　2.2.2 鞣质部位样品液制备 　　称取余甘子鞣质部位5 mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，加入50%甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，备用，进样前经0.45 μm微孔滤膜滤过。 　　2.3 余甘子药材及鞣质部位特征图谱方法学考察 　　2.3.1 精密度考察 　　分别精密吸取同一余甘子药材及鞣质部位样