通络醒脑泡腾片对MID模型大鼠血液流变学, iNOS,VEGF及LDH―5影响お.docVIP

通络醒脑泡腾片对MID模型大鼠血液流变学, iNOS,VEGF及LDH―5影响お 　　[摘要]考察通络醒脑泡腾片对多发脑梗死性痴呆（multiinfarct dementia，MID）模型大鼠血液流变学，iNOS，VEGF及LDH5影响。采用微血栓栓塞法制备MID大鼠模型，将造模成功大鼠50只随机分为模型对照组，甲磺酸双氢麦角毒碱片（喜得镇）组（07 mg?kg-1），通络醒脑泡腾片高、中、低剂量组（756，378，159 g?kg-1），另取10只假手术动物作为平行对照组，连续灌胃90 d。运用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力；腹主动脉取血测定不同切变率下的全血黏度和红细胞聚集指数；采用ELISA法测定血清iNOS和VEGF的含量；采用免疫组化和图像分析技术测定MID大鼠海马LDH5的表达。结果显示通络醒脑泡腾片能明显缩短MID模型大鼠的逃避潜伏期，增加逃逸平台进入次数，延长中环滞留时间，在1，5，30，200 S-14个切变率下，也能显著降低模型大鼠的全血黏度，红细胞聚集指数以及血清iNOS，VEGF含量和LDH5平均光密度，与模型对照组比较有统计学意义（P005）。结果表明通络醒脑泡腾片能提高MID模型大鼠学习记忆能力，改善外周血液流变学，降低iNOS，VEGF的含量及海马LDH5表达，进而改善脑组织能量供应。 　　[关键词]通络醒脑泡腾片；多发脑梗死性痴呆；血液流变学；VEGF；iNOS；LDH5 　　多发脑梗死性痴呆（multiinfarct dementia，MID）是因血栓或栓塞性脑血管病引起闭塞，累及脑部重要功能区域导致认知功能障碍的临床综合征[1]。MID作为血管性痴呆最主要的类型[23]，研究发现其多发梗塞灶形成与缺血后生化代谢[4]、血液流变学[5]异常密切相关，可通过影响炎症反应、血管新生、侧枝重建等代谢调控MID的病理进程。诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）[67]和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）[89]作为脑缺血时脑内重要的调节因子，其表达能反映脑供血状态与血管功能，乳酸脱氢酶5（lactate dehydrogenase5，LDH5）作为糖酵解的关键酶，其活性变化是缺血性梗死是否进行性加重的判定指标[10]。课题组前期研究发现，通络醒脑泡腾片能促进突触素重塑[11]和胰岛素降解酶[12]表达，改善Aβ2535所致的神经功能障碍，也能调控Na+K+ATP酶[13]与CCO酶[14]改善慢性缺血损伤引起的脑能量代谢障碍，进而提高学习记忆能力。为进一步探讨通络醒脑泡腾片抗痴呆的可能作用机制，本文从血液流变学及血管功能角度研究其对微血栓栓塞致MID大鼠模型全血黏度，红细胞聚集指数，iNOS，VEGF及LDH5的影响。 　　1材料 　　11仪器WMT100Morris水迷宫、Y迷宫，成都泰盟科技有限公司；SA6000自动血流变测试仪，北京赛科希德科技发展有限公司；酶标仪，Thermo公司，型号Multiskan MK3；2015型转轮式切片机，德国徕卡（Leica）仪器有限公司；TSJⅡ型全自动封闭式组织脱水机和PHYⅢ型病理组织漂烘仪，常州市中威医疗仪器有限公司；BA200Digital数码三目摄像显微摄像系统，麦克奥迪实业集团有限公司；ImagePro Plus 60 图像分析系统，美国Media Cybernetics公司。 　　12药物与试剂通络醒脑泡腾片（规格12 g/片，45 g原生药/片），四川同道堂药业集团股份有限公司，批甲磺酸双氢麦角毒碱片（喜得镇），天津华津制药有限公司，批号3H878T；血流变专用清洗液SAW，北京赛科希德科技发展有限公司，批号SA加样清洗维护液SAWZ，北京赛科希德科技发展有限公司，批号SAWZ2014 0101；大鼠一氧化氮合酶（NOS）ELISA Kit，英国ABBEXA公司，货号abx53065；大鼠血管内皮生长因子（VEGF）ELISA Kit，英国ABBEXA公司，货号abx54630；乳酸脱氢酶抗体（LDH5）兔多克隆抗体，北京博奥森生物技术有限公司，批号bs1810R。 　　13动物SD大鼠（SPF级），全雄，体重280～320 g，由成都达硕实验动物有限公司提供，生产许可证SCXK（川）201324，实验场地为国家中医药管理局成都中医药大学中药药理三级实验室，编号TCM2032043。大鼠均在室温22～24 ℃，明暗周期12 h/12 h条件下，自由饮水摄食。 　　2方法与结果 　　取健康SPF级SD大鼠，全雄，适应性喂养3 d后，Morris水迷宫实验筛选学