远端缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后血―脊髓屏障保护作用及相关机制研究.docVIP

远端缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后血―脊髓屏障保护作用及相关机制研究 　　[摘要] 目的 探讨远端缺血预处理（RIPC）对脊髓缺血再灌注损伤（SCIRI）后血-脊髓屏障（BSCB）的保护作用及相关的调控机制。 方法 36只日本大耳白兔随机均分为3组（n=12）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）和远端缺血预处理组（R组）。I/R组和R组阻断腹主动脉血流40 min，R组在腹主动脉阻断前1 h对双侧股动脉进行2个循环的10 min缺血/10 min再灌注处理。三组动物于术后24 h进行神经功能评价、BSCB通透性检测、相关蛋白（claudin-5、occludin、BDNF）及mRNA（BDNF）检测。 结果 在SCIRI后24 h，与S组相比，I/R组神经运动功能评分显著降低（P 0.05）；而R组神经运动功能评分高于I/R组（P 0.05），脊髓组织EB外渗量低于I/R组（P 0.01），claudin-5、occludin及BDNF（mRNA）的蛋白表达量均高于I/R组（P 0.01）。 结论 RIPC可通过阻止SCIRI后脊髓组织中紧密连接蛋白claudin-5、occludin表达的下降，降低BSCB通透性，维持BSCB结构完整。同时，在BSCB结构完整的基础上，RIPC可上调脊髓组织中BDNF的表达，发挥防治SCIRI的神经保护作用。 　　[关键词] 远端缺血预处理；脊髓；缺血再灌注损伤；血-脊髓屏障 　　[中图分类号] R651.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）07（c）-0033-05 　　在临床上，胸腹主动脉瘤修复术可导致脊髓缺血再灌注损伤（spinal cord ischemia reperfusion injury，SCIRI），而脊髓损伤后一个灾难性的、不可预知的并发症是截瘫[1]。目前，针对如何有效避免胸腹主动脉瘤修复术后SCIRI的发生，大量的临床及实验研究工作已经开展，然而，截瘫的发生仍不可完全避免。因此，需要探索更加有效的方法保护脊髓免受缺血再灌注损伤。 　　SCIRI的发生机制主要包括氧自由基介导的脂质过氧化作用、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸的释放、炎性反应及细胞凋亡等。其中，血-脊髓屏障（blood-spinal cord barrier，BSCB）的破坏是SCIRI的一个重要的病理改变，在SCIRI的发生发展中发挥重要的作用[2-3]。BSCB是血液循环和脊髓组织之间的生理和代谢物质扩散的屏障，严格地调控着脊髓微环境的稳态，因此早期修复BSCB对于防治脊髓损伤具有十分重要的意义。研究表明，远端缺血预处理（remote ischemic preconditioning，RIPC）可对心脏、脑、肾脏等多种器官或组织缺血再灌注损伤产生保护作用[4]，同时，RIPC对SCIRI的保护作用也在一些动物实验中得到了验证[5]，然而，其内在的保护机制仍不十分清楚。之前的研究发现，热休克蛋白、内源性大麻素、活性氧物质触发的抗氧化通路介导了RIPC对脊髓缺血的耐受[5-7]，但关于RIPC对SCIRI后BSCB的影响还未见文献报道。因此，本研究旨在探讨RIPC对SCIRI后BSCB可能的保护作用及其机制，从而进一步揭示RIPC防治SCIRI的内在机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物来源及分组 　　本实验共纳入36只日本大耳白兔，体重1.5～2.0 kg，雄性，购自武汉生物制品研究所（动物质量合格证号：NO.42000400003600），按照美国国立卫生研究院制订的实验室动物维护、使用指导意见和要求处理动物。每只动物都在各自单独的笼中饲养，环境温度及湿度均适宜，光暗周期为12 h/12 h，可自由摄入食物和水。麻醉前，所有动物的神经功能均完好。采用随机数字表法将动物均分为三组，每组12只：假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）和远端缺血预处理组（R组）。于术后24 h处死，其中6只用于BSCB通透性检测，另外6只用于神经功能评价及claudin-5、occludin、BDNF（mRNA）蛋白检测。 　　1.2 SCIRI模型的建立 　　经日本大耳白兔耳缘静脉注入3%戊巴比妥钠1.0 mL/kg麻醉动物，取仰卧位固定，保留其自主呼吸。经耳缘静脉留置针输注乳酸林格液4 mL/（kg?h），间断静脉注射戊巴比妥钠维持麻醉。经右侧股动脉置管以持续监测股动脉压和心电图，保持血流动力学稳定。加热毯维持直肠温度为（38.5±0.5）℃。I/R组和R组采用改良的Zivin法[8]创建SCIRI模型：取腹部正中切口，暴露分离腹主动脉，于左肾动脉根部下方0.5 cm处，以无损伤动脉夹夹闭腹主动脉，阻断时以股动脉压力波形消失，远端平均动脉压