酸水解盐析法从柠檬中提取果胶实验研究.docVIP

酸水解盐析法从柠檬中提取果胶实验研究 　　【摘要】目的：探讨酸水解-盐析法从柠檬皮中提取果胶的工艺，确定提取柠檬果胶的最佳工艺条件。方法：采用正交试验设计，选取提取时间、提取温度及料液比作为工艺因素，每个因素采用3个水平，选择L9(34)正交表进行实验，通过分析提取果胶的影响因素，优化果胶提取的工艺参数。结果：在此条件下提取柠檬果胶的适宜条件为：水料混合液pH值为2.0、提取温度为85℃、料液比为1:20、提取时间为2h。结论：在此条件下，果胶的提取得率最高。为从柠檬中提取果胶提供了依据及参考。 　　【关键词】柠檬；果胶提取；酸水解-盐析 　　 　　果胶是一种天然高分子聚合物，其基本结构是D-吡喃半乳糖醛酸，通常以部分甲酯化状态存在，属直链多糖[1]。果胶是人体必需的营养物质之一，是维持健康的重要物质。根据近年来的科学研究，发现包括果胶在内的食物纤维还具有防止肠癌和增强抗癌力、预防糖尿病、防止肥胖病以及抑制肠内致病菌的繁殖等功效[2]。 　　传统工艺的果胶提取主要用乙醇沉淀法，通常的方法主要有铝盐盐析法、乙醇沉淀法、离子交换法、微生物法、微波法等[3]。本文采用酸水解―铝盐盐析法提取柠檬果胶，并对影响果胶提取率的一些因素进行了研究，从而得出最佳提取工艺条件，为提高柠檬的综合利用价值，开发柠檬皮提取果胶提供资料依据。 　　1 仪器、材料及试剂 　　1.1 仪器 　　725紫外分光光度计（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；pHS-3C数字式酸度计（杭州东星仪器设备厂）；HHS电热恒温水浴锅（武汉市琴台医疗器械厂）；RE-52 AAA旋转蒸发仪（上海嘉鹏科技有限公司）；SHB-ⅢA循环水式真空泵（河南省太康科教器材厂）；AL204电子天平（梅特勒-托利仪器上海有限公司）；DGG-9070B恒温鼓风干燥箱（上海嘉信实验仪器有限公司）；DZ5-WS自动平衡离心机（赛特湘仪器离心有限公司）；粉碎机等。 　　1.2 材料 市售新鲜柠檬。 　　1.3 试剂 NaHSO4、浓盐酸、浓硫酸、浓磷酸、去离子水、氨水、硫酸铝、0.6％的偏磷酸钠、95％乙醇、活性炭、树脂l2 均为分析纯，半乳糖醛酸、咔唑为化学纯。 　　2 实验方法 　　2.1柠檬皮的预处理 　　取100g鲜柠檬皮用水清洗干净后切成3mm～5mm大小颗粒，转入烧杯加适量水，在60℃下浸泡30min，以除去果胶酶。取出用纱布包好，用0.5％的 NaHSO3溶液浸泡2h。在 70~80℃下烘干，直到恒重。用组织粉碎机搅碎，60目过筛。每次取5 g果渣，加50 mL去离子水(以下简称水)，用40℃左右的水洗，直到洗涤水变成无色为止。 　　2.2酸水解 　　漂洗沥干后加入4～5倍蒸馏水，并用稀盐酸调pH=2左右，加热到90℃左右50min～60min，不断搅拌，使原果胶转化为可溶性果胶。将水解完全的柠檬皮及溶液倒入布袋内压榨，并趁热用垫有尼龙布(100目)的布氏漏斗抽滤，分离出柠檬残渣，得果胶水解液。 　　2.3 盐析[4] 　　将所得的果胶水解液在温度为40~50℃的旋转蒸发仪中进行浓缩至有少量固形物出现。虑液冷却后，用盐酸调pH值为1-3，在不断搅拌下缓缓地加入一定量饱和硫酸铝溶液。硫酸铝加入过程中即可看到絮状果胶物质析出，静置10min使果胶沉淀完全。 　　2.4 纯化干燥 　　用真空泵进行抽滤，果胶沉淀物用一倍量的75%乙醇洗涤1～2次，在3600r/min下离心（10min），除去上清液，即得果胶。放入烘箱（50～60℃）烘干5h，称重，计算得率（%）。 　　2.5果胶含量的测定 　　2.5.1测定方法：采用咔唑比色法[5] 　　2.5.2标准曲线的绘制：取6支20mL试管，加浓硫酸12mL，放入冰水中冷却，各加入不同浓度的半乳糖醛酸标准溶液1mL，充分混合再置入冰水中冷却 10min，沸水浴中加热 10min，冷却至室温，加入0.15咔唑试剂lmL，充分混合，置室温下40min，于岛津Uv-160A从200~800nm自动扫描，在 525nm波长处有最大吸收峰，测A值，求出标准曲线方程：y= 0.005x+0.01；R= 0.999。 　　2.5.3果胶提取率的计算 　　果胶提取率 (％)=半乳糖醛酸含量(g)／柠檬渣中的果胶含量×100% 　　3 实验结果 　　3.1果胶的定性定量测定 　　3.1.1取干燥成品lg，加水10mL，即呈胶状液体；若加入乙醇，即出现悬浮沉淀。 　　3.1.2取干燥成品1g，加水50mL，加热搅拌使果胶完全溶解，加蔗糖5g，倒入12.5％柠檬酸溶液的烧杯中，冷却后即成柔软而有弹性的胶冻。 　　3.1.3称取干燥成品1g，用蒸馏水定容至50mL，在25℃下用酸度计测定pH为5.4。 　　经定性