金属蛋白酶表皮生长因子受体血管内皮生长因子在非小细胞肺癌中表达及临床意义.docVIP

金属蛋白酶表皮生长因子受体血管内皮生长因子在非小细胞肺癌中表达及临床意义 　　[摘要] 目的 探讨金属蛋白酶9（MMP9）、表皮生长因子受体（EGFR）、血管内皮生长因子（VEGF）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及与预后的关系。 方法 选取术后经病理证实的40例NSCLC标本为NSCLC组，10例肺良性病变为对照组。采用免疫组化MAXvision法检测MMP9、EGFR、VEGF在两组中的表达，采用χ2检验分析MMP9、EGFR、VEGF在NSCLC及肺良性病变中的表达差异，用Kaplan-Meier生存曲线探讨MMP9、EGFR、VEGF在NSCLC组织中的表达及其与预后的关系，采用Cox多因素回归分析法分析影响远期疗效的相关因素。 结果 MMP9、EGFR、VEGF在NSCLC组中的表达水平明显高于对照组（P 0.05）。MMP9、EGFR、VEGF蛋白阴性表达组3年生存率明显高于阳性表达组（P 0.05），阳性表达率越高，预后越差。影响NSCLC远期疗效的相关因素有年龄、吸烟史、病程、病理分期、淋巴结转移（P 0.05）。 结论 MMP9、EGFR与VEGF参与NSCLC的发生和发展，阳性表达的NSCLC患者预后差。NSCLC的远期疗效与患者的年龄、吸烟史、病程、病理分期、淋巴结转移呈正相关。 　　[关键词] 金属蛋白酶9；表皮生长因子受体；血管内皮生长因子；生存曲线；非小细胞肺癌 　　[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）10（b）-0010-04 　　近年来，世界各国肺癌的发病率和病死率均呈上升趋势，在多数发达国家，肺癌被列为恶性肿瘤死因的第1位。近70%非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者在确诊时已经是晚期，而外科手术切除后3年生存率仍较低[1]。肺癌的侵袭和转移仍是死亡的主要原因，也是目前治疗的难点。本文通过检测NSCLC组织中金属蛋白酶9（MMP9）、表皮生长因子受体（EGFR）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况，探讨MMP9、EGFR、VEGF与肺癌发生发展的关系，并应用生存分析的方法来分析影响病情及疗效的若干暴露因素的作用大小和方向，对判断其恶性程度和估计预后具有一定的指导意义，也是临床医学研究中较先进的研究手段。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取河北省秦皇岛市第二医院（以下简称“我院”）2008年1月～2009年12月手术切除且经常规病理证实的NSCLC标本40例作为NSCLC组，其中男22例，女18例，年龄30～76岁，中位年龄62岁。良性肺组织标本10例（炎性假瘤7例及结核球3例）作为对照组，其中男6例，女4例，年龄45～74岁，中位年龄67岁。在性别、年龄方面NSCLC组与对照组比较，差异无统计学意义（P 0.05）。 NSCLC组中有吸烟史（吸烟总量≥100支/年）24例，无吸烟史16例；腺癌34例，鳞癌5例，未分化癌1例；有淋巴结转移24例，无淋巴结转移16例；生存时间 3年28例，≥3年12例；采用国际抗癌联盟2009年修订的肺癌分期标准[2]进行分期，其中Ⅰ期6例，Ⅱ期20例，Ⅲ期14例。80%的患者术后予以铂类为基础的2～4个疗程的化疗。纳入的病例要求切缘阴性，术后生存期3个月以上。随访截止时间为2013年1月。随访率为100%。 　　1.2 方法 　　手术切除的肺癌组织于10%中性甲醛溶液固定12 h后取材，自来水冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片4 μm厚，60℃烤片2 h，经二甲苯-梯度乙醇脱蜡，自来水冲洗，短暂入蒸馏水待做免疫组化。免疫组化试剂盒采用MAXvision二步法，抗体选用MMP9、EGFR、VEGF单抗、二氨基联苯酸（DAB）显色剂，免疫组化试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。根据每种抗体要求，进行相应的抗原修复，PBS冲洗3次×3 min，每张切片滴加50 μL正常非免疫动物血清，37℃孵育[3]。除去血清，每切片滴加50 μL一抗，37℃孵育60 min，PBS液冲洗3次×3 min后，滴加50 μL生物素标记的二抗（MAXvision），37℃孵育15 min，PBS液冲洗3次×3 min，新鲜配制的DAB液显色，苏木精复染，封片后显微镜下观察。 　　1.3 结果判定 　　采用单盲法阅片，显色部位应正确，无背景显色。MMP9抗原存在于恶性肿瘤细胞及其周围血管内皮细胞和增生的纤维母细胞的胞浆中；EGFR抗原是一种转膜蛋白，存在于恶性细胞胞浆内；VEGF抗原可诱导血管新生，存在于肿瘤细胞浆内。因此，MMP9胞浆显色、EGFR胞浆/胞膜显色、VEGF胞浆显色，颜色为棕黄色。肿瘤细胞无显色为“