银翘散对流感病毒FM1感染胸腺缺陷小鼠血清中IFNγIgG含量影响.docVIP

银翘散对流感病毒FM1感染胸腺缺陷小鼠血清中IFNγIgG含量影响 　　摘 要：目的：观察银翘散（YQS）对流感病毒感染胸腺缺陷小鼠细胞因子的影响。方法：以流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株（FM1）感染小鼠为模型，采用银翘散灌胃治疗。用ELISA法分别检测感染后第1、3、5、7天小鼠血清中IFN-γ、IgG的含量。结果：银翘散各给药组IFN-γ的含量明显降低，与病毒感染模型组比较差异有显著性意义（P0.05）。结论：银翘散可以降低血清中IFN-γ，说明银翘散可以降低炎性因子的表达，从而减少炎性损伤。IgG含量与感染模型组差异不是十分显著，有可能因为在病毒感染早期，机体只能产生低水平低亲和力的抗体。 　　关键词：银翘散；流感病毒；细胞因子 　　中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）02-0013-03 　　 　　银翘散(YQS)由连翘、银花、苦桔梗、薄荷、竹叶、生甘草、芥穗、淡豆豉、牛蒡子9味中药组成，为治疗温病之首方，是辛凉清解的代表方剂，以其治疗风温、温热病以及某些杂病（属于邪在卫分、上焦）而闻名，并一直沿用至今。现代临床上用于治疗流行性感冒、急性扁桃腺炎、咽喉炎、肺炎、疱疹、麻疹、流行性腮腺炎等病毒性感染疾病［1］。本实验观察了该药对流感病毒感染胸腺缺陷小鼠血清中IFN-γ、TNF-α、TGF-β1及IgG含量的影响，从分子水平探讨该药治疗病毒性呼吸道感染的作用机制。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1 材料 　　1.1.1 药物及毒株 　　银翘解毒口服液：批号070301，河北华威制药有限公司。病毒唑：批号070609，天津药业集团新郑股份有限公司。病毒：流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株（FM1），由中国中医科学院中药研究所提供，鸡胚传代后，血凝滴度为1:512，-70℃冻存备用。乙醚、生理盐水：由北京化学试剂公司提供。小鼠IFN-γ、TNF-αELISA试剂盒购自晶美生物工程（北京）有限公司，小鼠TGF-β1及IgG试剂盒购自Biotechnology Systems公司。 　　1.1.2 动物及分组 　　BALB/c nu/nu免疫缺陷裸小鼠，雌雄各半，共72只，体重18~20g，购自北京维通利华实验技术有限公司。按体重随机分组原则，将BALB/c nu/nu裸鼠分为正常对照组，模型组，病毒唑阳性药组，银翘散高、中、低剂量治疗组，各组按感染后1天、3天、5天、7天不同时相各分为4小组，每小组3只，分别标记，分笼饲养，所有动物自由摄食和饮水，控制温度湿度（18～25℃和55％±2%）。 　　1.1.3 仪器 　　微孔板扫描酶标仪(Bio-Tek公司)，微量加样器，CO?2恒温培养箱，Labofuge 400R低温高速离心机(德国Heraeus公司)，DEM-Ⅲ型自动酶标洗板机（北京拓普分析仪器有限责任公司）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 模型制备 　　以乙醚轻度麻醉小鼠后，BALB/c nu/nu裸鼠正常对照组以生理盐水30μL/只滴鼻，其余各组以FM1株病毒液30μL/只滴鼻。 　　1.2.3 实验给药 　　感染1小时后给药，给药体积为0.2mL/10g，病毒唑组每次腹腔注射0.07g/kg/d，银翘散高中低剂量组分别为40g/kg/d、20g/kg/d、10g/kg/d。正常空白组、感染模型组灌服生理盐水。 　　1.2.4 取材 　　分别于感染24、72、120、168h后，各组小鼠摘眼球取血，离心分离血清，放入-20℃冰箱中保存待测，脱颈椎处死小鼠，无菌取胸腺、脾脏、双侧后肢股骨骨髓，以备它用。 　　1.2.5 观察指标及方法 　　小鼠血清IFN-γ、IgG含量的测定。本实验采用双抗体夹心ELISA法，检测程序按照试剂盒说明书进行。 　　1.2.6 统计学处理 　　所有实验数据用±s表示，采用SPSS统计分析软件进行统计学处理。在进行显著性检验时，组间比较采用单因素方差分析，以P0.05为差异有显著性。 　　 　　2 结果 　　 　　2.1 YQS对流感病毒FM1感染小鼠血清IFN-γ含量的影响 　　实验结果显示，流感病毒感染小鼠后，感染模型组各时相IFN-γ的含量较正常空白组均有所增加，且各时间点二者比较，差异显著（P0.01）。其中第1、3天呈逐日上升趋势，第3天达峰值，第5天开始下降。银翘散各剂量组以及病毒唑组IFN-γ在各时间点的走势与感染模型组相同，但IFN-γ的含量较感染模型组均有所下降，差异显著（P0.01）。说明银翘散可以抑制病毒感染后IFN-γ的表达。 　　各组比较见图1。 　　 　　2.2 YQS对流感病毒FM1感染小鼠血清IgG含量的影响 　　实验结果显示，流感病毒感染后，病毒感