金纳米粒子修饰聚合物固相微萃取整体柱制备及其性能研究.docVIP

金纳米粒子修饰聚合物固相微萃取整体柱制备及其性能研究 　　DOI： 10.3724/SP.J.1096.2011.01247 　　 　　（广西师范大学化学化工学院， 药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室， 桂林 541004） 　　摘 要 通过在毛细管聚合物整体柱表面修饰金纳米粒子, 制备了一种可选择性捕获含巯基化合物的固相微萃取整体柱。首先制备聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯-乙二醇二甲基丙烯酸酯）整体柱，在其表面化学修饰半胱胺；通过半胱胺上的巯基基团将金纳米粒子固定在整体柱的孔表面。以巯基类化合物为探针，评价了固相微萃取整体柱的萃取性能。结果表明，由于Au对巯基配体间有高亲和性，此柱能选择性捕获巯基化合物。金纳米粒子整体柱及其再生柱对谷胱甘肽的萃取容量分别为0.718和0.603 μmol。考察了此微萃取整体柱对巯基药物的萃取富集性能，其对卡托普利的富集倍数达30倍，可用于血浆样品中卡托普利的萃取富集。 　　关键词 金纳米粒子；微萃取整体柱；毛细管电泳；巯基化合物 　　 　　 2010-12-21收稿；2011-04-08接受 　　本文系国家自然科学基金（No和973计划项目子课题（No.2010CB933902）资助项目 　　?? E-mail: fangguiye@163.com 　　 　　1 引 言 　　近年来，整体柱优良的性能使其在样品前处理领域得到了快速发展［1］。整体柱应用于样品前处理时具有很多优势：整体柱的柱容量大,可以提高萃取容量; 整体柱中特有的穿透孔使其具有极好的通透性，不仅有利于萃取效率的提高, 而且可以使用较大流速，缩短萃取时间;在整体柱的制备过程中，通过对孔结构的调节和选择不同的单体，可以合成出不同结构和萃取性能的整体柱萃取材料［2］。Zheng等［3］发展了用于血浆样品预处理的聚合物整体柱管内固相微萃取方法。最近，Krenkova等［4］制备了一种用于选择性富集磷酸肽的包埋羟基磷灰石纳米粒子毛细管聚合物整体柱，经过该柱的选择性富集，分析物的检测信号明显提高。 　　金纳米粒子（AuNPs）具有特殊的稳定性、小尺寸效应、量子效应、表面效应和良好的生物亲和效应［5］， 已被用于从复杂的基体中萃取和富集目标分析物［6］。Tseng课题组［7］利用金与巯基之间的特异性结合，用AuNPs选择性富集了巯基化合物。随后，他们采用类似的方法，建立了分析人体尿液中氨基硫醇化合物和人血浆中键合氨基硫醇蛋白质的方法［8,9］。Xu等［10］制备了一种修饰AuNPs的新型有机聚合整体固定相，由于这种聚合物整体柱孔表面的AuNPs可以与含半胱氨酸的多肽发生吸附作用，使得这种整体柱能从多肽混合物中选择性地捕获含半胱氨酸的多肽。 　　本研究利用AuNPs容易与巯基基团共价键合的特点，结合有机聚合物整体柱基质的优良性质，制备了内径为530 μm的AuNPs修饰聚合物固相微萃取整体柱，作为新的萃取介质。通过对巯基化合物的选择性捕获，考察了此固相微萃取整体柱的选择性、萃取容量及再生能力。以卡托普利为探针，考察了此微萃取整体柱对巯基化合物的萃取富集能力。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　熔融石英毛细管（内径75 μm，外径365 μm；内径530 μm，外径690 μm；河北永年锐沣色谱器件有限公司）。自组装毛细管电泳仪参见文献［11］。高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）。 　　甲基丙烯酸缩水甘油酯（GMA）、乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）、偶氮二异丁腈（AIBN）, 购自美国Alfa Aesar公司； 半胱胺（上海梯希爱化成工业发展公司）；二硫苏糖醇（DTT，上海晶纯实业有限公司）；谷胱甘肽、乙酰半胱氨酸、卡托普利（分析纯，美国Sigma-Aldrich公司）；实验用水由Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司）提供。 　　2.2 AuNPs修饰聚合物固相微萃取整体柱的制备 　　AuNPs由本实验室合成，粒径约为15 nm［12］。聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯-乙二醇二甲基丙烯酸酯）（poly（GMA-co-EDMA））整体柱参照文献［10］制备。在室温下，用助推器将2.5 mol/L 半胱胺溶液通入制备好的poly（GMA-co-EDMA）整体柱中，反应20 min；用水冲洗柱子，直至流出液为中性，即可得硫醇基衍生化的毛细管整体柱poly （GMA-co-EDMA-SH）。在室温下，向poly（GMA-co-EDMA-SH）柱通入AuNPs，直至红色溶液流出，用水冲去未反应的AuNPs，得到AuNPs修饰毛细管聚合物整体柱 poly （GMA-co-EDMA-AuNPs）整体柱。 　　采用文献［13］制备的固相萃取装置：除去一次性医用注射器的不